《Pathogens》：The Canine Leishmaniosis Proteinogram: A Reference Serum Electrophoretic Atlas of 5544 Dogs over 18 Years
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血清蛋白毛细管电泳可表征犬利什曼病（CanL）检测犬中的异常蛋白血症，作为体液免疫激活的综合临床病理表型。本项回顾性实验室研究评估了2009年至2026年间葡萄牙5544只接受CanL检测犬的血清蛋白电泳模式。抗利什曼原虫抗体结果被分为五个有序类别：阴性、不确
血清蛋白毛细管电泳可表征犬利什曼病（CanL）检测犬中的异常蛋白血症，作为体液免疫激活的综合临床病理表型。本项回顾性实验室研究评估了2009年至2026年间葡萄牙5544只接受CanL检测犬的血清蛋白电泳模式。抗利什曼原虫抗体结果被分为五个有序类别：阴性、不确定、低阳性、阳性/高阳性和非常高阳性。分析了总蛋白、白蛋白、α1、α2、β和γ组分、白蛋白/球蛋白比值和白蛋白/γ-球蛋白比值。研究人员使用一个单独定义的由254只临床健康血清阴性且年龄≥1至<4岁犬组成的参考亚群，建立了本研究特异性的非参数95%参考区间。排除不确定结果后，二元分析纳入2454只血清阴性犬和2910只血清阳性犬。与血清阴性犬相比，血清阳性犬具有更高的中位γ-球蛋白浓度（1.5 vs. 0.8 g/dL；p < 0.001），以及更低的白蛋白/球蛋白比值（0.7 vs. 1.0；p < 0.001）和白蛋白/γ-球蛋白比值（1.9 vs. 4.2；p < 0.001）。在有序血清学量表中，γ-球蛋白从中位数0.8 g/dL增加至2.1 g/dL（p < 0.001），而白蛋白/γ-球蛋白比值则从4.2下降至1.2。γ-球蛋白显示出最强的有序关联性（ρ = 0.522；p < 0.001）和中等的单标记物区分血清阳性的能力（受试者工作特征曲线下面积 = 0.768；95%置信区间：0.755–0.780）。这些发现将CanL蛋白谱定义为一种渐进性、可量化的免疫病理表型，其特征是γ区扩增和白蛋白相应降低，支持血清蛋白电泳作为解释和监测的参考工具。
论文解读文章
研究背景与科学问题
犬利什曼病（CanL）是由婴儿利什曼原虫引起的一种人兽共患媒介传播寄生虫病，临床表现广泛，从亚临床感染到严重的慢性全身性疾病不等。犬是婴儿利什曼原虫的主要家养宿主，疾病表达强烈依赖于宿主免疫应答与寄生虫之间的相互作用。保护性细胞免疫有助于控制感染，而过度且持续的体液免疫激活则与疾病进展、循环免疫复合物形成、肾小球损伤、全身性炎症以及特征性的异常蛋白血症相关。
尽管血清蛋白电泳（SPE）已被用于描述CanL相关的异常蛋白血症，如低白蛋白血症、白蛋白/球蛋白（A/G）比值降低和多克隆高γ-球蛋白血症，但既往研究多将其视为诊断的辅助描述，而非主要研究对象。许多研究仅进行血清阴性与阳性犬的二元比较，确认了感染中存在异常蛋白血症，但未能阐明随着抗利什曼原虫体液免疫反应强度的增加，血清蛋白电泳表型是否发生渐进性重塑。此外，关于完整电泳谱如何随抗利什曼原虫血清学类别的增加而变化，仍缺乏深入的蛋白质谱中心分析。因此，本研究旨在系统量化抗利什曼原虫血清反应强度与血清蛋白电泳表型之间的定量关系。
研究方法概述
这是一项回顾性、基于实验室的分析研究，使用了2009年至2026年间提交至CEDIVET兽医实验室的犬类记录。样本来自葡萄牙大陆及自治岛屿地区的587个兽医医疗中心。最终工作数据库包含5544只具有完整抗利什曼原虫血清学和血清蛋白电泳结果的独有犬只。血清蛋白电泳分离采用Sebia Minicap Flex Piercing分析仪的毛细管电泳技术。抗利什曼原虫抗体检测使用商品化间接ELISA试剂盒LEISCAN/CIVTEST，结果按制造商截断值分为五个有序类别。统计分析方法包括Mann-Whitney U检验、Kruskal-Wallis检验、Spearman等级相关、受试者工作特征（ROC）曲线分析、二元及有序逻辑回归，并依据ASVCP和CLSI指南建立了基于254只临床健康血清阴性年轻成年犬的研究特异性95%参考区间。
研究结果
3.1 研究人群与血清学分类
最终数据集包含5544只犬，其中2454只为血清阴性，180只不确定，368只低阳性，1229只阳性/高阳性，1313只非常高阳性。性别与血清学状态存在统计学关联，但效应量很小。血清阳性犬的中位年龄略低于血清阴性犬，但效应量也非常小。
3.2 血清阴性与阳性犬的血清蛋白电泳谱
与血清阴性犬相比，血清阳性犬的总蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白浓度更高，白蛋白浓度和百分比更低，A/G比值和白蛋白/γ-球蛋白（A/γ-G）比值也更低。最大的效应量出现在γ-球蛋白浓度、γ-球蛋白百分比、A/γ-G比值、白蛋白百分比和A/G比值。
3.3 有序血清学量表上的血清蛋白电泳谱
在完整的五级血清学量表上，γ-球蛋白浓度呈现渐进性增加，中位值从血清阴性组的0.8 g/dL升至非常高阳性组的2.1 g/dL。A/γ-G比值则呈平行下降趋势。γ-球蛋白浓度与血清学类别递增显示出最强的有序关联性。
3.4 区分性能与调整后建模
在单标记物ROC分析中，γ-球蛋白浓度区分血清阳性与阴性犬的性能最高，但仅为中等水平。经Youden指数确定的探索性截断值约1.05 g/dL。在调整了年龄、性别和采样年份后，γ-球蛋白浓度与血清学状态的关联仍然很强。探索性有序逻辑回归也证实了这一关联。
3.5 临床健康血清阴性犬的参考区间
从254只临床健康、血清阴性的年轻成年犬中计算出了研究特异性的95%参考区间，为解释电泳图谱提供了平台特定的基线。大多数参考限的置信区间达到了理想的ASVCP精度目标。
讨论与结论总结
讨论部分指出，本研究的主要发现是γ-球蛋白区在完整的有序血清学量表上呈现出清晰的分级扩增，伴随白蛋白相关比例和衍生比值的相应降低。这一模式在二元比较、有序分析、效应量估计、ROC分析和调整后的回归模型中均保持一致，表明血清蛋白谱捕获了CanL检测犬中体液免疫激活的可测量电泳表型。γ-球蛋白浓度是最具信息量的变量，其渐进性增加表明电泳谱不仅在血清阳性动物中异常，而且会随着抗体反应的增强而发生定量变化。白蛋白浓度的降低可能涉及多种并发机制。β-组分应谨慎解读，其在血清阳性犬中升高但与血清学类别的有序关联较弱，表明β区扩增可能发生在部分犬中，但不是抗利什曼原虫血清学强度增加的主导标志。ROC曲线结果需谨慎对待，γ-球蛋白浓度仅提供中等程度的区分能力，且1.05 g/dL的截断值是数据特异性的，不应被解释为CanL的诊断标准。研究还讨论了局限性，包括回顾性设计导致的偏倚、缺乏统一的临床分期和治疗史等关键信息，以及电泳方法的平台特异性。
研究结论部分翻译如下：在这项大型回顾性队列中，升高的抗利什曼原虫抗体滴度与一种连贯且渐进的血清蛋白电泳表型相关。该表型以γ-球蛋白扩增为主导，伴随白蛋白相关比值的相应下降。在所评估的电泳变量中，γ-球蛋白浓度显示出与ELISA Rz类别的最强关联，并提供了中等的单标记物区分血清阳性的能力，而β-球蛋白浓度的有序关联较弱。这些发现支持血清蛋白毛细管电泳作为一种手段，用于表征在CanL检测犬中与抗利什曼原虫血清学强度相关的综合临床病理表型。定量血清学仍然是CanL诊断的核心，高滴度在兼容的临床或临床病理背景下可确认疾病。蛋白谱不应被解释为独立的诊断测试，也不应作为临床严重程度的直接衡量标准。相反，它提供了一个定量和可视化的框架，当与抗体滴度、临床表现、肾脏评估、尿液分析和疾病特异性诊断测试相结合时，可能有助于优化解读。
