BDNF Val66Met（rs6265）在强直性脊柱炎中的基因型–表型描述性研究：罗马尼亚队列

《Current Issues in Molecular Biology》：BDNF Val66Met (rs6265) in Ankylosing Spondylitis: A Descriptive Genotype–Phenotype Study in a Romanian Cohort

　　

背景：强直性脊柱炎（AS）是一种慢性炎症性疾病，具有肌肉骨骼和关节外表现，并伴有心脏代谢合并症。脑源性神经营养因子（BDNF）参与疼痛处理、神经可塑性、炎症信号传导和代谢调节。功能性BDNF Val66Met多态性（rs6265）影响细胞内转运和活动依赖性BDNF分泌，但其在AS中的临床相关性仍鲜有表征。本研究评估了AS患者中BDNF Val66Met的分布，并探讨其与疾病活动、炎症、疼痛、抑郁症状和代谢参数的关系。方法：本单中心横断面研究纳入81例AS患者，无健康对照组。采用四引物扩增阻碍突变系统聚合酶链反应（T-ARMS-PCR）进行基因分型。临床评估包括强直性脊柱炎疾病活动指数（BASDAI）、基于C反应蛋白（CRP）的强直性脊柱炎疾病活动评分（ASDAS-CRP）、疼痛数字评定量表（NRS）以及医院焦虑抑郁量表抑郁亚量表（HADS-D），同时测量CRP和代谢指标。ASDAS-CRP被指定为主要临床结局。统计分析包括Mann–Whitney U检验、Fisher精确检验、Spearman相关分析并结合Benjamini–Hochberg错误发现率校正、Hardy–Weinberg平衡检验，以及探索性多变量线性与logistic回归。结果：队列包括81例患者（61例男性，20例女性；平均年龄53.2 ± 12.5岁）。T-ARMS-PCR得到57例GG（70.4%）和24例GA（29.6%）基因型判定，未观察到AA条带模式；Met等位基因频率为14.8%。基因型判定未经测序或限制性片段长度多态性分析独立确认。未发现基因型与临床、炎症或代谢变量之间存在显著关联。校正年龄、性别、病程、当前生物制剂治疗状态和当前吸烟状态后，基因型与ASDAS-CRP无关（B = 0.045，95% CI ?0.238至0.328，p = 0.754；n = 80）。经Benjamini–Hochberg校正后，疼痛NRS仍与BASDAI和CRP相关，而HADS-D仍与BASDAI相关。根据协调联合临时声明定义，24/81例参与者（29.6%）存在代谢综合征；针对各代谢组成部分的用药情况未系统获得。结论：在该AS队列中，未发现BDNF Val66Met与疾病活动、炎症标志物、抑郁症状或代谢参数之间存在关联的证据。本研究仅有80%把握度检测Cohen’s d ≥ 0.69的效应，不能排除更小的基因型相关差异。研究结果还描述了该队列的心脏代谢特征以及疼痛、炎症和抑郁症状之间的关系。

强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis, AS）是脊柱关节炎（spondyloarthritis, SpA）谱系中的慢性免疫介导炎症性疾病，主要累及中轴骨骼；持续性骶髂关节和脊柱炎症可导致慢性疼痛、进行性结构损伤及晚期强直，外周关节、附着点和关节外器官亦可受累。HLA-B27全球AS患者阳性率为约80%–95%，但遗传易感性还涉及其他MHC和非MHC位点；本队列81例均HLA-B27阳性。当前证据支持IL-23/IL-17通路参与发病和慢性炎症维持。疾病活动采用BASDAI（Bath Ankylosing Spondylitis Disease Activity Index，强直性脊柱炎疾病活动指数）和ASDAS（Ankylosing Spondylitis Disease Activity Score，强直性脊柱炎疾病活动评分）评估，ASAS–EULAR 2022推荐ASDAS监测疾病活动并指导治疗。AS还伴心脏代谢合并症，近期荟萃分析报告AS患者代谢综合征（metabolic syndrome, MetS）合并患病率为15.5%。BDNF（brain-derived neurotrophic factor，脑源性神经营养因子）参与疼痛处理、神经可塑性、炎症信号和代谢调节；BDNF基因位于11p14.1，Val66Met（rs6265；c.196G>A，p.Val66Met）影响BDNF前结构域、细胞内转运和活动依赖性分泌。欧洲人群Met等位基因频率通常为10%–20%，健康罗马尼亚人群Met为19.26%。rs6265在AS中的临床相关性尚不明确，作者检索未发现既往研究评估rs6265与AS或中轴型SpA疾病活动。因此，研究人员评估罗马尼亚AS队列中BDNF Val66Met分布，并探索其与疾病活动、炎症、疼痛、抑郁症状和代谢参数的关联，以ASDAS-CRP为主要临床结局。

研究人员开展单中心横断面研究，纳入81例AS患者，来源于罗马尼亚Bihor County Emergency Clinical Hospital风湿科，2026年3月1日至6月30日连续招募，符合改良纽约标准；HLA-B27阳性不是入选标准，但所有患者入组前均有阳性记录；无健康对照组。DNA送Iuliu Ha?ieganu University of Medicine and Pharmacy, Cluj-Napoca, Romania行BDNF基因分型。主要技术方法（≤250字）：采用T-ARMS-PCR（tetra-primer amplification refractory mutation system polymerase chain reaction，四引物扩增阻碍突变系统聚合酶链反应）检测rs6265 c.196G>A，凝胶电泳判读，由三名研究者盲法独立判读，随机10例盲法重复结果一致；未用Sanger测序或PCR-RFLP确认。临床评估包括BASDAI、ASDAS-CRP、疼痛NRS（Numerical Rating Scale，疼痛数字评定量表）、HADS-D（depression subscale of Hospital Anxiety and Depression Scale，医院焦虑抑郁量表抑郁亚量表）、CRP和代谢指标；统计采用Shapiro–Wilk、Welch t检验、Mann–Whitney U检验、卡方/Fisher精确检验、Spearman相关、Benjamini–Hochberg错误发现率校正、Hardy–Weinberg平衡精确检验及探索性多变量线性/logistic回归。样本队列来源已注明。

3.1 队列人口学、治疗与生活方式特征：81例中61例男性、20例女性；平均年龄53.2 ± 12.5岁；诊断中位年龄29岁，病程中位23年；27例接受当前生物制剂治疗，53例非生物治疗，1例治疗信息缺失。GG与GA在性别、年龄、诊断年龄类别、病程、当前生物治疗状态上无显著差异。当前吸烟在GG为13/57、GA为0/24，三分类吸烟分布未调整分析p = 0.025，但GA为零单元格且调整模型不显著，不能解释为独立关联。按性别BASDAI无显著差异。

3.2 BDNF Val66Met基因型分布与等位基因频率：77/81首次获得清晰判读，4例重复扩增后最终判读率100%。57例GG（70.4%）、24例GA（29.6%），未观察到AA条带；G（Val）等位基因频率85.2%，A（Met）为14.8%。Hardy–Weinberg平衡精确检验p = 0.198，但AA期望数仅1.8，检测基因型误分能力有限；无AA为未经独立方法确认的观察。

3.3 队列临床与代谢特征：GG与GA在BASDAI、ASDAS-CRP、CRP、疼痛NRS、HADS-D及代谢参数上均无显著差异。ASDAS-CRP均值2.56 ± 0.66 vs. 2.49 ± 0.72，p = 0.717，效应量0.10；BASDAI为3.5 ± 1.4 vs. 3.7 ± 1.4，p = 0.668；CRP中位数8.3 vs. 7.1 mg/L，p = 0.721；疼痛NRS为4 vs. 4，p = 0.579；HADS-D为6 vs. 5.5，p = 0.829。关节外表现包括葡萄膜炎6例（7.4%）、银屑病5例（6.2%）、炎症性肠病3例（3.7%），无显著差异。血压亦无显著差异。

3.4 队列心脏代谢特征：高甘油三酯24例（29.6%），低HDL-C 32例（39.5%），血压升高61例（75.3%），空腹血糖≥100 mg/dL 18例（22.2%），腰围升高27例（33.3%）。按协调联合临时声明定义，MetS为24/81（29.6%）；采用NCEP-ATP III腰围阈值敏感性分析为18例（22.2%）。排除6例腰围校正者后，腰围升高GA 8/20 vs. GG 13/55（OR = 2.13，95% CI 0.61–7.23，p = 0.244），MetS为GA 6/20 vs. GG 12/55（OR = 1.53，95% CI 0.39–5.47，p = 0.544），均不显著。BMI与腰围r = 0.519，p < 0.001，腰围每增加1 kg/m² BMI增加1.08 cm。未调整MetS基因型OR = 2.17，95% CI 0.70–6.73，p = 0.182。

3.5 按生物治疗状态的探索性分析与调整回归：27例生物治疗、53例非生物治疗，1例缺失后排除，n = 80。生物治疗组CRP、ASDAS-CRP、BASDAI、疼痛NRS、HADS-D显著低于非生物组，年龄中位51.0 vs. 58.0岁，p = 0.005；病程和代谢指标无差异。全队列ASDAS-CRP均值2.5 ± 0.7，71.6%为高/很高疾病活动；BASDAI均值3.6，31/81（38.3%）BASDAI ≥ 4。多变量线性模型中，ASDAS-CRP的基因型B = 0.045，95% CI ?0.238–0.328，p = 0.754；生物治疗B = ?0.942，p < 0.001；吸烟不显著；R² = 0.424，校正R² = 0.377，F(6,73) = 8.96，p < 0.001。BASDAI模型中基因型B = 0.175，95% CI ?0.454–0.804，p = 0.581；生物治疗B = ?1.425，p < 0.001；吸烟不显著；R² = 0.304，校正R² = 0.246，F(6,73) = 5.31，p < 0.001。MetS logistic模型中基因型OR = 1.31，95% CI 0.40–4.30，p = 0.658；吸烟OR = 0.60，95% CI 0.11–3.44，p = 0.570；因事件数少且含6个预测因子，估计不精确。

3.6 相关分析：对疼痛NRS、BASDAI、HADS-D、CRP、年龄、诊断年龄、收缩压、BMI的28对Spearman相关行Benjamini–Hochberg校正后，6个相关q < 0.05：NRS与BASDAI r = 0.754，q < 0.0001；NRS与HADS-D r = 0.378，q = 0.0030；NRS与CRP r = 0.372，q = 0.0030；BASDAI与HADS-D r = 0.536，q < 0.0001；收缩压与BMI r = 0.588，q < 0.0001；年龄与诊断年龄r = 0.467，q < 0.0001，后者为结构性预期。

讨论部分总结：4.1 基因型分布方面，本队列Met频率14.8%，与ALFA欧洲人群及Vulturar等罗马尼亚队列等位基因频率无显著差异（p ≈ 0.16、p ≈ 0.15），因无对照仅作描述，不解释疾病易感性。Chi?等用同一rs6265 T-ARMS-PCR检测的AA样本可见A特异条带，说明A特异引物功能，但仍不能完全排除误分，尤其AA。Hardy–Weinberg平衡p = 0.198，但AA期望数仅1.8；按ALFA欧洲AA频率3.7%，81人无AA概率约4.7%，按两个罗马尼亚队列4.00%和5.26%概率约3.7%和1.3%，故无AA为边缘/不常见，可能偶然，也可能与未检测误分相容，但未确认。4.2 无基因型–表型关联方面，GG与GA临床、炎症、代谢变量无差异；调整后基因型与ASDAS-CRP、BASDAI无关。Val66Met关联研究异质且常未复制，应视为探索性，而非证明不存在较小效应。样本仅24例GA且无确认AA，80%把握度仅检测d ≥ 0.69，无健康对照；除相关分析外多重性未正式控制。HADS-D ≥ 8者15/79（19.0%），与基因型无关。4.3 疾病活动、疼痛与抑郁症状方面，NRS与BASDAI强相关，反映疼痛在患者报告活动中的核心作用，且BASDAI含疼痛条目；BASDAI-HADS-D、NRS-HADS-D相关支持疾病活动、疼痛感知与抑郁症状负担密切；NRS-CRP相关提示疼痛部分与持续炎症活动有关。校正后保留的相关提示炎症和抑郁症状均可能贡献症状严重度和感知疾病活动。4.4 生物治疗状态方面，生物治疗组BASDAI、ASDAS-CRP、CRP更低，符合TNF-α抑制剂和IL-17抑制剂疗效；但横断面设计不能估计因果，ASDAS-CRP含CRP故非独立证据；生物组更年轻；代谢影响未直接评估。4.5 心脏代谢与心血管风险方面，MetS为29.6%，近AS荟萃分析15.5%的两倍，但低于罗马尼亚成人PREDATORR报道的38.5%；比较需谨慎。血压升高最常见，其次低HDL-C、腰围升高、高甘油三酯、高血糖；慢性炎症与代谢紊乱及心血管风险相关。体力活动与CRP非显著负相关（r = ?0.207，p = 0.064），69.1%久坐；运动仍为管理组成。MetS在GG为24.6%、GA为41.7%，OR = 2.17不显著，不能确认或排除。4.6 局限包括：T-ARMS-PCR未独立确认，无模板和已知基因型阳性对照未每次一致；无健康对照；全为HLA-B27阳性；样本量小；横断面；变量非同一标准化访视；6例腰围校正且校验非盲；HADS仅抑郁亚量表且无AS罗马尼亚语验证；治疗组比较有适应证混杂；代谢药物未系统纳入，MetS可能低估；葡萄膜炎可能低报；多重性未全控制；未评估基因–基因/环境；未测循环BDNF/表达；无影像。4.7 未来方向：需健康对照、多中心大队列含AA、独立复制、纵向设计，评估BDNF变异与代谢异常和疾病活动，及作为生物标志物的潜力。

结论翻译：在这项罗马尼亚强直性脊柱炎患者队列中，BDNF Val66Met（rs6265）多态性与疾病活动、炎症标志物、抑郁症状或代谢参数无显著关联。鉴于可用的基因型组样本量（GG n = 57 vs. GA n = 24），本研究有80%把握度检测约Cohen’s d ≥ 0.69的标准化组间效应；因此，更小的基因型相关关联可能未被发现。本研究提供了rs6265基因型分布和AS患者心脏代谢特征的描述性数据，但结果应结合以下背景解释：样本量中等、未观察到AA条带模式且未经测序或PCR-RFLP独立确认、缺乏健康对照组以及横断面设计。需要更大规模、独立且最好多中心的研究，以进一步阐明BDNF Val66Met在AS中的潜在临床相关性。