基于RNAse H2 PCR技术快速低成本检测家蝇杀虫剂击倒抗性（kdr）基因突变

《Scientific Reports》：Rapid and cost-effective screening of pyrethroid resistance markers in Musca domestica using RNAse H2 PCR

摘要杀虫剂抗性在昆虫害虫种群中普遍存在，与化学防治效果降低以及对公共健康和农业生产的不利影响相关。因此，监测抗性是有效综合害虫管理的重要组成部分，也是推荐的做法。靶标位点的基因突变通常是重要的抗性机制，对于某些物种，特定的靶标位点突变或突变组合是对特定类别杀虫剂抗性的高价值标记。采用新的评估技术可以更快、更具成本效益地评估这些重要的突变。我们开发了利用RNAse H2 PCR（rhPCR）的高特异性来评估家蝇中五个特征明确的击倒抗性突变存在与否的测定方法，家蝇是奶牛场中一种重要的害虫，其kdr表型复杂。使用一组共同样本，我们评估了四种方法的反应准确性和整体kdr基因分型成功率：(1) 传统金标准Sanger法，使用纯化的DNA模板作为PCR模板，(2) 使用腿部匀浆作为PCR模板的Sanger法，(3) 使用腿部匀浆的rhPCR法，(4) 使用腿部匀浆的基于Nanopore的方法。结果表明，单个rhPCR反应准确，且整体kdr基因分型成功率在首次尝试时与金标准Sanger法相当。与基于Sanger的基因分型相比，使用rhPCR进行基因分型的成本和时间减少了75%或以上。为展示使用rhPCR方法筛选kdr单核苷酸多态性的广泛适用性和可比性，我们对美国奶牛场的kdr基因型进行了评估，发现其kdr模式与其他使用传统方法的最近研究相似，但成本显著降低。