口服鱼油乳剂中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸乙酯同时定量反相高效液相色谱法的开发与验证

《Journal of Food Measurement and Characterization》：Development and validation of a reversed-phase high-performance liquid chromatography method for simultaneous quantification of eicosapentaenoic acid and docosahexaenoic acid in their ethyl ester form from oral fish oil emulsion

　　

摘要

本研究介绍了一种经验证的反相高效液相色谱（HPLC）方法，用于定量分析口服即用型鱼油乳液中必需的Omega-3脂肪酸——二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）。采用YMC Triart C18色谱柱（150 mm × 4.6 mm，5 μm）、乙腈-磷酸梯度洗脱液以及215 nm处的二极管阵列（PDA）检测器，该方法具有高精度和高效率。分析条件包括5 μL进样量、1 mL/min流速和35 °C柱温。EPA和DHA分别在14.0和15.7分钟洗脱。经国际人用药品注册技术协调会（ICH）验证的方法显示出高准确度、良好的线性（决定系数R2 ≥ 0.999）、精密度（相对标准偏差RSD < 1%）和稳健性。通过液相色谱-质谱联用（LC-MS）分别检测到m/z 303和327处的去质子化离子，证实了未反应EPA和DHA的存在。通过LC-MS分别检测到m/z 331（EPA乙酯，EPA-EE）和m/z 357（DHA乙酯，DHA-EE）处的乙酯离子，证实了EPA和DHA衍化为乙酯形式后进行碱性催化酯交换的成功。强制降解试验证实了方法的稳定性，使其成为一种具有成本效益的分析方法。此外，基于绿色分析程序指数（GAPI）和蓝色适用性等级指数（BAGI）评估，所开发的方法可被认为是相当环保的。

图文摘要

本研究介绍了一种经验证的反相高效液相色谱（HPLC）方法，用于定量分析口服即用型鱼油乳液中必需的Omega-3脂肪酸——二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）。采用YMC Triart C18色谱柱（150 mm × 4.6 mm，5 μm）、乙腈-磷酸梯度洗脱液以及215 nm处的二极管阵列（PDA）检测器，该方法具有高精度和高效率。分析条件包括5 μL进样量、1 mL/min流速和35 °C柱温。EPA和DHA分别在14.0和15.7分钟洗脱。经国际人用药品注册技术协调会（ICH）验证的方法显示出高准确度、良好的线性（决定系数R2 ≥ 0.999）、精密度（相对标准偏差RSD < 1%）和稳健性。通过液相色谱-质谱联用（LC-MS）分别检测到m/z 303和327处的去质子化离子，证实了未反应EPA和DHA的存在。通过LC-MS分别检测到m/z 331（EPA乙酯，EPA-EE）和m/z 357（DHA乙酯，DHA-EE）处的乙酯离子，证实了EPA和DHA衍化为乙酯形式后进行碱性催化酯交换的成功。强制降解试验证实了方法的稳定性，使其成为一种具有成本效益的分析方法。此外，基于绿色分析程序指数（GAPI）和蓝色适用性等级指数（BAGI）评估，所开发的方法可被认为是相当环保的。

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