《American Journal of Otolaryngology》：YRNA1 expression as a candidate prognostic biomarker in oral tongue squamous cell carcinoma: an exploratory cohort study
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中文翻译（摘要部分）：
头颈癌是全球第七大常见恶性肿瘤，是癌症相关发病率和死亡率的重要原因。其中，头颈鳞状细胞癌（HNSCC）是最常见的组织学类型，约占所有头颈癌的90%。流行病学上，HNSCC男性发病率约为女性的三倍，尤其在老年人群中更为显著。已确定的危险因
中文翻译（摘要部分）：
头颈癌是全球第七大常见恶性肿瘤，是癌症相关发病率和死亡率的重要原因。其中，头颈鳞状细胞癌（HNSCC）是最常见的组织学类型，约占所有头颈癌的90%。流行病学上，HNSCC男性发病率约为女性的三倍，尤其在老年人群中更为显著。已确定的危险因素包括烟草和酒精等致癌物暴露，而人乳头瘤病毒（HPV）感染在年轻患者中被认为是重要的病因因素，通常与较好的预后和治疗反应相关。
尽管诊断技术和多模式治疗策略（包括手术、放疗、化疗或其组合）不断进步，HNSCC的总体预后仍不理想。特别是，口腔舌鳞状细胞癌（OTSCC）被认为是最具侵袭性的亚部位之一，其特征是快速局部浸润、早期淋巴扩散和高复发风险。因此，口腔舌癌患者的5年生存率据报道约为60%，这主要归因于诊断延迟和疾病固有的生物学侵袭性。此外，舌头的解剖和功能重要性意味着即使治愈性治疗也常导致言语、吞咽和整体生活质量的长期损害。
目前，OTSCC的预后评估主要依赖于临床病理因素，包括肿瘤大小、浸润深度（DOI）、淋巴结状态、神经周围浸润（PNI）、淋巴血管浸润（LVI）和肿瘤淋巴结转移（TNM）分期。尽管这些参数具有临床价值，但它们无法完全解释具有相似病理特征的患者之间观察到的临床结局的显著异质性。这一局限性强调了识别能更好反映肿瘤生物学并改善超越传统分期系统的预后分层能力的分子生物标志物的必要性。癌症的发生和发展不仅涉及基因改变（如点突变和染色体畸变），还涉及表观遗传和转录后调控机制，包括非编码RNA（ncRNA）的失调。值得注意的是，人类基因组约98%被转录为ncRNA，它们在细胞周期调控、凋亡、增殖和细胞迁移中发挥关键作用。这些调控RNA的表达或功能改变可破坏细胞稳态并促进肿瘤发生。
在小型ncRNA中，YRNA构成一个保守的短转录本家族，长度为84-112个核苷酸，是Ro60核糖核蛋白复合物的组成部分。在人类中，四个高度保守的YRNA转录本聚集在染色体7q36上的单一基因组位点。尽管YRNA最初被鉴定为在RNA监视和DNA复制中发挥作用，越来越多的证据表明它们参与癌症生物学的关键方面。多项研究报道了YRNA在不同恶性肿瘤中的失调表达，包括前列腺癌、乳腺癌、肾透明细胞癌和HNSCC。例如，在肾透明细胞癌中，抑制YRNA已被证明可抑制细胞增殖，支持其在肿瘤生长中的功能作用。在膀胱癌中，YRNA表达模式与患者生存相关，强调其作为临床相关预后生物标志物的潜力。
研究表明，YRNA可被加工成小型YRNA衍生片段（sYRNA），特别是在凋亡和脂质负载的巨噬细胞中。然而，尽管兴趣日益增长，YRNA在HNSCC尤其是OTSCC中的生物学功能和临床相关性仍知之甚少。针对YRNA1在HNSCC中生物学作用的计算机模拟分析提示，YRNA1可能调控参与关键致癌过程的基因网络，包括肿瘤转移、癌症干细胞维持和凋亡。值得注意的是，较高的YRNA1表达与肿瘤抑制基因FAT1的表达降低相关。FAT1功能丧失与HNSCC细胞系中肿瘤侵袭性和迁移能力增强相关，而YRNA1表达升高与晚期肿瘤生长和较高T分期相关。这些发现提示YRNA1失调与侵袭性肿瘤行为之间存在潜在的机制联系，尽管临床验证仍然有限。
尽管治疗和手术管理取得进展，OTSCC仍是一种临床挑战性恶性肿瘤，生存率持续不佳，表明传统临床病理标志物不足以进行准确的预后分层。这一差距凸显了对能够捕捉侵袭性肿瘤行为背后生物学异质性的分子生物标志物的需求。YRNA是一类保守的小型非编码RNA家族，参与RNA稳定性、DNA复制和细胞增殖，越来越多地被牵涉到癌症相关通路中；然而，YRNA1（该家族中最持续失调的成员）的临床意义尚未在OTSCC中进行研究。鉴于OTSCC的侵袭性临床病程和缺乏经过验证的基于RNA的预后标志物，评估YRNA1表达可能为肿瘤生物学和患者风险分层提供重要见解。因此，本探索性研究的目的是量化人类OTSCC组织中的YRNA1表达，并评估其与临床病理特征和生存结局的关联，以确定YRNA1表达是否可作为OTSCC患者的候选预后生物标志物。
论文解读
一、研究背景与问题
头颈癌是全球第七大常见恶性肿瘤，头颈鳞状细胞癌（HNSCC）占所有头颈癌约90%，具有明显的男性优势，发病率约为女性的三倍。已确定的危险因素包括烟草、酒精暴露以及人乳头瘤病毒（HPV）感染。尽管诊断技术和多模式治疗策略不断进步，HNSCC总体预后仍不理想。口腔舌鳞状细胞癌（OTSCC）是HNSCC中最具侵袭性的亚部位之一，以快速局部浸润、早期淋巴扩散和高复发风险为特征，5年生存率约为60%。目前OTSCC的预后评估主要依赖临床病理因素，包括肿瘤大小、浸润深度（DOI）、淋巴结状态、神经周围浸润（PNI）、淋巴血管浸润（LVI）和TNM分期，但这些参数无法充分解释具有相似病理特征患者之间的临床结局异质性。因此，识别能更好反映肿瘤生物学、改善预后分层的分子生物标志物成为迫切需求。人类基因组约98%被转录为非编码RNA（ncRNA），它们在细胞周期调控、凋亡、增殖和迁移中发挥关键作用。YRNA是保守的小型ncRNA家族，长度84-112个核苷酸，是Ro60核糖核蛋白复合物的组成部分，四个高度保守的YRNA转录本聚集在染色体7q36。YRNA最初被鉴定为参与RNA监视和DNA复制，越来越多的证据表明其参与癌症生物学的关键方面，已在多种恶性肿瘤中报道失调表达，包括前列腺癌、乳腺癌、肾透明细胞癌和HNSCC。在肾透明细胞癌中抑制YRNA可抑制细胞增殖；在膀胱癌中YRNA表达模式与患者生存相关。计算机模拟分析提示YRNA1可能调控肿瘤转移、癌症干细胞维持和凋亡相关基因网络，且YRNA1高表达与肿瘤抑制基因FAT1表达降低相关，FAT1功能丧失与HNSCC细胞系侵袭性和迁移能力增强相关。然而，YRNA1在OTSCC中的临床意义尚未被研究，本研究旨在量化OTSCC组织中的YRNA1表达，评估其与临床病理特征和生存结局的关联，以确定其是否可作为候选预后生物标志物。
二、研究设计与方法
这是一项回顾性临床队列研究，遵循STROBE指南和REMARK建议。肿瘤标本来自2021至2022年间在德黑兰医科大学伊玛目霍梅尼医院接受OTSCC原发性手术治疗的患者，所有样本均经组织病理学确认鳞状细胞癌，排除既往接受新辅助化疗或放疗、组织采集前有局部复发或第二原发肿瘤的患者。26例患者全部由同一外科医生按照标准化方案进行根治性手术切除，切缘阴性（>5 mm），术后均接受统一方案辅助放疗（总剂量6000-7000 cGy，30-35次分割，150-200 cGy/次，每周5天，总疗程6-8周），无患者接受辅助化疗。病理参数包括DOI、肿瘤扩展、PNI和LVI由认证头颈病理学家评估，DOI的7 mm截断值基于本队列中位数分布，仅用于描述性目的，非临床既定阈值。主要技术方法包括：从福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）肿瘤标本中提取总RNA，使用TRIzol试剂法；Nanodrop分光光度法进行RNA质量控制和DNase处理，A260/280比值≥1.8视为可接受，通过琼脂糖凝胶电泳评估RNA完整性，GAPDH管家基因Ct值低于30验证cDNA合成成功；使用ADBIOKOREA逆转录试剂盒合成cDNA；设计YRNA1和GAPDH特异性引物进行定量实时PCR（qRT-PCR），以同一患者相邻非肿瘤舌组织作为校准样本，采用ΔΔCt法计算相对表达量并转换为log?值。统计分析使用SPSS 26.0和GraphPad Prism 8.0，连续变量采用Mann-Whitney U检验，分类变量采用Fisher精确检验，Spearman秩相关分析评估变量间关联，Kaplan-Meier生存分析和log-rank检验比较生存分布，多变量Cox比例风险回归模型限制为T分期和YRNA1表达两个预设预测因子，比例风险假设通过Schoenfeld残差评估。
三、研究结果
3.1 基线特征与生存状态关联
研究最终纳入26例患者，平均年龄58.9±17.1岁，中位年龄60岁，男性15例（57.7%），女性11例（42.3%）。无患者有吸烟、饮酒或HPV感染史。三年随访期间，11例（42.3%）患者死于OTSCC相关原因，15例（57.7%）存活。病理T分期与疾病特异性生存显著相关（p=0.014），晚期肿瘤（T3-T4）在死亡患者中更常见。PNI在死亡患者中也显著更常见（p=0.036）。死亡患者的YRNA1表达（2-ΔΔCt）显著高于存活者，中位数分别为1.52（IQR 0.40-4.17）和0.38（IQR 0.10-1.25），p=0.020。
3.2 相关性分析
Spearman相关分析显示，T分期与3年内死亡的相关性最强（ρ=0.52），YRNA1表达次之（ρ=0.46）。DOI（ρ=0.36）、肿瘤扩展（ρ=0.37）和PNI（ρ=0.30）与死亡呈中等程度相关。年龄、肿瘤位置和N分期与生存相关性较弱。肿瘤相关参数之间存在强相互关系，特别是DOI与T分期（ρ=0.83）、肿瘤大小与DOI（ρ=0.73）、LVI与N分期（ρ=0.79）。值得注意的是，YRNA1表达与T分期呈中等正相关（ρ=0.48），与其他临床病理特征仅呈弱相关。
3.3 生存分析
中位随访36个月（IQR 32-38），Kaplan-Meier生存分析显示晚期T分期（T3-T4）患者生存显著较差，log-rank p=0.010。PNI阳性肿瘤患者预后显著较差，log-rank p=0.040。按中位YRNA1表达值二分后，高表达组生存显著较差，log-rank p=0.020，该中位分割仅用于图示目的，无既定临床有效性。多变量Cox模型中，晚期T分期与死亡风险显著相关（HR=4.25，95% CI: 1.18-15.26，p=0.027），YRNA1表达每增加一个log?单位，死亡风险增加43%（HR=1.43，95% CI: 1.12-2.03，p=0.049）。比例风险假设满足（YRNA1：χ2=0.91，p=0.340；T分期：χ2=1.16，p=0.280；全局检验：χ2=2.07，p=0.410）。
四、讨论与结论
研究发现YRNA1高表达与OTSCC不良疾病特异性生存显著相关，YRNA1表达与死亡率和晚期T分期呈中等正相关，在调整T分期后YRNA1仍显示预后潜力，表明其捕获了传统分期参数之外的预后信息。这一结果与既往HNSCC研究中YRNA1高表达与晚期肿瘤分期和侵袭性特征相关的报道一致。机制上，计算机模拟分析提示YRNA1可能调控上皮-间质转化、癌症干性、凋亡和细胞周期控制相关基因网络，YRNA1高表达与肿瘤抑制基因FAT1下调显著相关，FAT1功能丧失与迁移能力增强、侵袭性和晚期肿瘤生长相关，为YRNA1高表达与不良临床结局的关联提供了合理的生物学解释。YRNA可被加工成sYRNA片段，特别是在细胞应激或凋亡条件下，这些片段已在细胞外囊泡和体液中检测到，提示基于YRNA的生物标志物未来可能发展为微创预后评估工具。
研究存在若干局限性：样本量小（n=26）和事件数有限（n=11）限制统计功效并增加多变量模型过拟合风险；中位数二分化YRNA1仅用于图示目的；缺乏外部验证队列，无法就YRNA1作为预后生物标志物的临床效用得出确定性结论；合并症状态和体能状态未系统记录；本队列无吸烟、饮酒和HPV暴露，缺乏变异性无法分析这些危险因素对预后的潜在影响。
研究结论：本探索性研究发现，YRNA1表达升高与晚期T分期和较差疾病特异性生存显著相关。在调整T分期的简化多变量模型中，YRNA1保留预后潜力，log?转换表达每增加一个单位，OTSCC相关死亡风险增加43%。结果与既往使用替代分析标尺报道YRNA1上调的研究一致，支持YRNA1过表达在肿瘤进展中的潜在作用。然而，由于样本量有限和探索性设计，这些结果应谨慎解读。YRNA1可能代表候选预后生物标志物，但在任何临床转化考虑之前，必须在更大、独立的队列和机制研究中得到确认。
