lncRNA LINC00276-202通过miR-204/miR-211响应区域及hnRNPL-β-连环蛋白通路调控视网膜色素上皮分化

《Scientific Reports》：The long non-coding RNA LINC00276-202 regulates RPE differentiation through hnRNPL and β-catenin-associated signaling

摘要

非编码RNA在调控基因表达和多种生物学过程中发挥着关键作用。尽管微小RNA（miRNAs/miRs）的功能已被广泛认知，但长链非编码RNA（lncRNAs；超过200个核苷酸，几乎没有蛋白质编码潜力）的功能仍未完全阐明。在本研究中，我们探讨了lncRNA在人类视网膜色素上皮（ARPE-19）细胞分化过程中的功能，发现LINC00276在RPE分化期间持续且显著地上调表达。利用反义GapmeR沉默LINC00276-202（ENST00000418420.1）后，RPE分化相关基因（包括RPE65、MITF、TRPM1和TRPM3）的表达显著降低；而LINC00276-202过表达则恢复了这些基因的表达水平。计算机模拟分析在LINC00276-202中鉴定出一个miR-204-5p/miR-211-5p共有的响应区域。这两种miRNA均使LINC00276-202相关报告基因活性适度升高，而删除该共有的种子识别区域则减弱了这一响应。重要的是，尽管种子区域缺失突变体的转录本积累量增加，但该突变体构建体未能像野生型（WT）LINC00276-202那样有效诱导RPE65的表达，表明序列完整性对其生物活性有所贡献。通过RNA pull-down联合质谱分析，鉴定出PURB、SART3、ANXA6和hnRNPL为潜在的蛋白结合伴侣。其中，hnRNPL经RNA免疫沉淀和免疫印迹验证为LINC00276-202的互作蛋白。LINC00276-202调控hnRNPL蛋白水平，而hnRNPL参与了LINC00276-202介导的β-连环蛋白丰度调控及TCF/LEF转录活性的调节。综上所述，这些发现表明LINC00276-202是RPE分化的新型调控因子，其作用机制涉及miR-204/miR-211响应区域、hnRNPL互作以及β-连环蛋白相关信号通路，与视网膜退行性疾病具有潜在的关联性。