CRISPR/Cas9敲除APOBEC3显著提升慢病毒载体外源基因保真性——新型CHAI包装细胞系的建立

《Molecular Therapy》：APOBEC3 Knockout in Lentiviral Packaging Cells Improves Therapeutic Transgene Sequence Fidelity

【字体：大中小】 时间：2026年10月06日 来源：Molecular Therapy 11.4

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　　摘要慢病毒载体是将外源基因递送至靶细胞的成熟方法。慢病毒载体具有良好的疗效和安全性，但外源基因保真性仍是令人担忧的问题。整合的外源基因中功能缺失突变可能降低治疗效果，而原癌基因外源基因中的功能获得突变可能导致转导细胞恶性转化。外源基因突变长期以来被归因于逆转录错误。然而，通过

摘要

慢病毒载体是将外源基因递送至靶细胞的成熟方法。慢病毒载体具有良好的疗效和安全性，但外源基因保真性仍是令人担忧的问题。整合的外源基因中功能缺失突变可能降低治疗效果，而原癌基因外源基因中的功能获得突变可能导致转导细胞恶性转化。外源基因突变长期以来被归因于逆转录错误。然而，通过对整合入CD34+造血干细胞和祖细胞的外源基因进行深度测序，我们检测到胞嘧啶到胸腺嘧啶突变的频率异常偏高。因此，我们假设阻断APOBEC3抗病毒胞嘧啶脱氨酶家族将提高外源基因保真性。我们证明，利用CRISPR/Cas9敲除HEK293T包装细胞系中的APOBEC3基因座可将慢病毒外源基因总突变减少超过90%。相反，破坏小鼠白血病病毒的APOBEC3防御机制可导致C/G到T/A突变增加约30倍。此外，我们确定APOBEC3敲除与旨在提高滴度的多基因敲除包装细胞系兼容。这种新型组合产生了"CHAI"——一种基于HEK293T的细胞系，能够产生高滴度、外源基因保真度近乎完美的慢病毒载体。