《Biomolecules》：Effectiveness of Native and Enhanced Extracellular Vesicle Preparations Assessed in Animal Models of Multiple Sclerosis: A Meta-Analysis
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细胞外囊泡（extracellular vesicle, EV）制剂已成为多种炎症性或神经退行性中枢神经系统（central nervous system, CNS）疾病潜在有用的治疗工具。与间充质干细胞（mesenchymal stem cell, MSC）
细胞外囊泡（extracellular vesicle, EV）制剂已成为多种炎症性或神经退行性中枢神经系统（central nervous system, CNS）疾病潜在有用的治疗工具。与间充质干细胞（mesenchymal stem cell, MSC）制剂相比，其具有增强的血脑屏障（blood–brain barrier, BBB）通透性、进入受损脑组织的能力，以及更好的质量评估和给药选择。此类疗法可能特别有益的一个疾病是多发性硬化（multiple sclerosis, MS），这是一种自身免疫性疾病，可能由与某些病毒抗原的交叉反应触发，产生具有多个斑块状病灶的广泛脱髓鞘脑脊髓炎。已开发出多种MS动物模型，包括通过注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（myelin oligodendrocyte glycoprotein, MOG）35–55诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）、接种Theiler小鼠脑脊髓炎病毒（Theiler’s murine encephalomyelitis virus, TMEV）以及Cuprizone模型。通过文献检索，研究人员检索到24项在啮齿动物（大鼠或小鼠）MS模型中进行治疗性给予天然或增强型EV制剂、适合本荟萃分析的实验研究。研究人员发现，实验组与对照组之间在临床评分（标准化至0–5量表）（?1.21，95%置信区间（confidence interval, CI）[?1.49,?0.93]（天然EVs）；?1.67，CI [?2.28,?1.05]（增强型EVs））、炎症和脱髓鞘病理评分，以及若干炎症和髓鞘修复分子标志物方面存在统计学显著均数差。这些结果指出，需要将使用此类MS动物模型获得的令人鼓舞的初步结果向临床转化。
1. Introduction
多发性硬化（MS）是一种脑和脊髓脱髓鞘疾病，形成多发性斑块状病灶并导致胶质瘢痕。其被认为是一种自身免疫性疾病，由未知刺激在遗传和环境因素背景下触发；病毒感染后与自身抗原交叉反应可能是最合理机制，EBV的EBNA1与GlialCAM交叉反应，HLA变异等参与多基因易感性。CNS反应性T细胞与自身抗原接触后激活，引起单核/巨噬细胞浸润和小胶质细胞募集，导致脱髓鞘、轴突损伤和丢失，致脑炎性T细胞-小胶质细胞交互加剧该过程。MS动物模型包括注射MOG
35–55诱导的EAE、TMEV脑内接种、Cuprizone（CPZ）毒性脱髓鞘模型及LPC/溴化乙锭直接注射。当前疾病修正治疗（disease-modifying therapies, DMTs）可控制炎症活动，但促髓鞘再生和修复已建立CNS损伤的能力有限。间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）具有自我更新、增殖和分化能力，来源包括骨髓、脐带、脂肪等，标志物CD73、CD90、CD105等阳性，CD34、CD45等阴性；MSCs通过抗炎、抗凋亡和再生机制发挥作用。细胞外囊泡（extracellular vesicles, EVs）为细胞释放的膜性颗粒，包括exomeres、exosomes、microvesicles和凋亡小体，MSC-EV可复制亲本MSC的旁分泌效应。增强策略包括预处理、基因修饰、货物富集和表面工程。既往系统综述和荟萃分析支持MSC-EV，但本研究更新并扩展至其他来源和增强EV，并纳入炎症和髓鞘再生标志物。
2. Materials and Methods
研究按PRISMA和PROSPERO进行。2.1 Search Strategy：检索PubMed、Web of Science（WoS）和Scopus，使用相应关键词组合，并补充相似文章或引用文章。2.2 Study Selection：纳入原始文章、EV治疗、体内鼠/大鼠MS模型、定量数据；排除预防性给药、体外给药、仅免疫组化（IHC）免疫表型、非CNS免疫细胞、无阳性对照、无变异度量、动物数量不透明及非鼠/大鼠研究。2.3 Data Extraction：提取临床评分、炎症和脱髓鞘病理评分、少突胶质前体细胞（OPCs）或少突胶质细胞分化标志物PDGFRα、Olig2、PLP、髓鞘碱性蛋白（MBP）、Black-Gold髓鞘定量，以及炎症标志物TNFα、IFNγ、白细胞介素等，通过RT-PCR、ELISA、Western blotting或IHC评估。两名评估者独立提取，必要时使用WebPlotDigitizer辅助。临床评分标准化至0–5，病理评分标准化至0–3，不同测量技术采用标准化均数差（SMD）。2.4 Statistical Analysis：使用RevMan 5.4.1，采用逆方差法和DerSimonian and Laird随机效应模型，评估τ
2、I
2和95%置信区间，构建森林图，使用漏斗图、JASP选择模型敏感性分析和SYRCLE RoB工具评估偏倚。
3. Results
3.1 Selection and General Features of Studies：检索得PubMed 130篇、WoS 154篇、Scopus 79篇，补充7篇；去重219篇，摘要排除143篇，详细排除21篇，最终纳入24篇。研究涵盖MS模型类型、EV来源、给药途径、增强策略和主要结局。3.2 Clinical and Pathological Scores：临床评分采用0–5量表，天然EVs的均数差（MD）为?1.21，CI [?1.49,?0.93]；增强EVs的MD为?1.67，CI [?2.28,?1.05]，均显著。炎症采用H&E染色、脱髓鞘采用LFB或FluoroMyelin染色评估，实验组均优于对照组，增强EV优于天然EV，且天然EV对炎症评分的改善高于脱髓鞘评分。3.3 Markers of Inflammation：纳入TNFα、IFNγ、IL-1β、IL-6、IL-10和IL-18，采用SMD比较；天然和增强EV均显示统计学显著差异，增强EV差异更大。3.4 Markers of Remyelination：评估PDGFRα、Olig2、MBP、PLP和Black-Gold髓鞘染色；除PDGFRα外，其余标志物均显示显著差异并支持EV治疗，增强EV对MBP的SMD为5.58，而天然EV为2.68。3.5 Risk of Experimental and Publication Bias Analyses：SYRCLE RoB工具发现组间混杂调整和失访偏倚方面存在问题；JASP选择模型敏感性分析对发表偏倚进行调整，报告了调整后的效应值和置信区间。
4. Discussion
本荟萃分析纳入24篇文献，显示干细胞和胶质细胞释放的EV在MS动物模型中具有治疗潜力。EAE和Cuprizone模型不能完全再现MS病理，C57BL/6 EAE模型难以观察复发，TMEV研究较少，毒性脱髓鞘模型存在固有加速髓鞘再生。EAE MOG
35–55结合炎症和脱髓鞘特征，适合评估小胶质细胞靶点；Cuprizone主要再现髓鞘再生，对OPC/少突胶质细胞成分敏感。EV来源多样，多数为MSC来源，少数为OPC/少突胶质细胞、小胶质细胞和HEK293细胞。MSC-EV效果较好，HEK293天然EV效果最差，可能作为阴性对照。机制涉及miR134、miR146a-5p、miR125a以及TLR4、PI3K/AKT、NF-κB等通路。OPC分化过程中PDGFRα下降，Olig2、MBP、PLP增加，Black-Gold染色确认髓鞘恢复。EV表征采用电镜、原子力显微镜、动态光散射、纳米颗粒跟踪分析等，直径多小于150 nm或小于100 nm，并检测蛋白标志物，建议遵循MISEV指南。给药浓度平均为10
10 EVs/ml，剂量多为10–100 μg，少数为150 μg或400 μg；给药途径以尾静脉注射为主，也有脑室内、鞘内、鼻内或脑内微型泵给药，频次从单次至多次，持续1–4周。增强EV优于天然EV，但可能存在发表偏倚，增强方法多样，无法确定最优方案。与其他疗法如CAR-Treg和抗CD20抗体比较仍有待深入。局限性包括异质性高、采用SMD、死亡动物报告不足、选择性报告、EV表征不完整、样本量小、模型异质、缺乏长期结局和标准化功能终点，发表偏倚分析不能完全解决问题。
5. Conclusions
EV治疗与对照组在临床评分、神经炎症和脱髓鞘/髓鞘再生标志物方面存在显著差异，增强EV效果更高。MSC-EV可能提供可靠的临床选择，但标准化和质量控制至关重要。患者选择、剂量、途径和疗程仍未解决，作用机制复杂且不完全清楚，不良事件尤其是过度免疫抑制风险尚不明确。未来需研究不同治疗开始时间、剂量-反应关系、疗效和潜在副作用，以及与其他MS疗法的联合策略。
