通过衍生物尺寸排阻高效液相色谱法控制活性药物成分中的残留蛋白质杂质

《AAPS PharmSciTech》：Controlling Residual Protein Impurities in Active Pharmaceutical Ingredients (APIs) by Derivative Size-Exclusion High-Performance Liquid Chromatography (SEC-HPLC)

【字体：大中小】 时间：2026年10月07日 来源：AAPS PharmSciTech 5.1

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　　摘要本研究旨在开发一种可靠的蛋白标记策略，用于在化学复杂的活性药物成分（API）丰富环境中检测酶，这些环境中常用二甲基亚砜（DMSO）作为溶剂。我们比较了两种靶向赖氨酸的荧光染料，发现NHS-荧光素优于异硫氰酸荧光素（FITC），产生更强的信号，并在蛋白浓度与吸光度强度之间呈

摘要

本研究旨在开发一种可靠的蛋白标记策略，用于在化学复杂的活性药物成分（API）丰富环境中检测酶，这些环境中常用二甲基亚砜（DMSO）作为溶剂。我们比较了两种靶向赖氨酸的荧光染料，发现NHS-荧光素优于异硫氰酸荧光素（FITC），产生更强的信号，并在蛋白浓度与吸光度强度之间呈现一致的线性关系。优化实验表明，较高的蛋白和染料浓度可提高标记效率，其中500 μM NHS-荧光素可提供可重复的信号。重要的是，标记在各种条件下均保持稳健：20—25%的DMSO增强了性能，但50%的DMSO降低了效率；而洗涤剂的效应因类型而异，两性离子型和非离子型洗涤剂支持高效标记，而离子型洗涤剂几乎完全消除了标记效果。优化后的方案被证明适用于实际的工业酶（蛋白X），即使在存在多种小分子的情况下，仍能保持定量可测量性。值得注意的是，这些实验可以很容易地从尺寸排阻色谱（SEC）-高效液相色谱（HPLC）转移到SEC-超高效液相色谱（UPLC）。总之，这些结果建立了一种多功能、高灵敏度和广泛适用的蛋白标记和检测方法，适用于化学挑战性环境，在药物研究、化合物筛选、蛋白定量和工业质量控制方面具有强大的应用潜力。

图形摘要

本研究旨在开发一种可靠的蛋白标记策略，用于在化学复杂的活性药物成分（API）丰富环境中检测酶，这些环境中常用二甲基亚砜（DMSO）作为溶剂。我们比较了两种靶向赖氨酸的荧光染料，发现NHS-荧光素优于异硫氰酸荧光素（FITC），产生更强的信号，并在蛋白浓度与吸光度强度之间呈现一致的线性关系。优化实验表明，较高的蛋白和染料浓度可提高标记效率，其中500 μM NHS-荧光素可提供可重复的信号。重要的是，标记在各种条件下均保持稳健：20—25%的DMSO增强了性能，但50%的DMSO降低了效率；而洗涤剂的效应因类型而异，两性离子型和非离子型洗涤剂支持高效标记，而离子型洗涤剂几乎完全消除了标记效果。优化后的方案被证明适用于实际的工业酶（蛋白X），即使在存在多种小分子的情况下，仍能保持定量可测量性。值得注意的是，这些实验可以很容易地从尺寸排阻色谱（SEC）-高效液相色谱（HPLC）转移到SEC-超高效液相色谱（UPLC）。总之，这些结果建立了一种多功能、高灵敏度和广泛适用的蛋白标记和检测方法，适用于化学挑战性环境，在药物研究、化合物筛选、蛋白定量和工业质量控制方面具有强大的应用潜力。