一种使用左旋多巴测定鸟嘌呤的新型无标记荧光开启方法

《Journal of Fluorescence》：A Novel Label-Free Fluorescent Turn-on Method for the Determination of Guanine Using Levodopa

　　

摘要

本文描述了一种新型简单、直接、选择性和快速的荧光法用于测定鸟嘌呤。该方法基于左旋多巴（L-3,4-二羟基苯丙氨酸（L-DOPA））在优化条件下的荧光增强"开启"响应。对该反应进行了详细的光谱和热力学研究。当向左旋多巴中加入鸟嘌呤时，观察到荧光强度的显著增强，同时发射最大值伴有约10 nm的轻微红移。这种荧光响应与L-DOPA局部环境的相互作用依赖性变化一致。光谱和缔合分析支持在研究条件下发生非共价结合，尽管现有数据未能确定唯一的分子结合构型或鉴定所涉及的特定官能团。在所测试的碱基中，鸟嘌呤产生了最明显的荧光增强，表明在优化条件下具有优先的分析响应。在0-280 μM的鸟嘌呤浓度范围内获得了荧光强度与鸟嘌呤浓度之间的线性关系，检测限为0.088 μM（0.0133 μg/ml）。按照ISO/IEC 17025、AOAC、USP、美国EPA和美国FDA的标准对所述方法进行了验证，通过测量数据真实性、准确度、偏差、精密度、日内重复性、日间再现性、标准偏差、稳健性、灵敏度、范围、耐用性、稳定性和检测限。结果表明具有优良的数据质量、可靠性和一致性。使用标准添加（加标）法将该方法应用于人血清样品中鸟嘌呤的测定。获得了平均准确度为（93.3-102.2%）和良好精密度（平均RSD = 0.67%，n = 3）。该方法为水相介质中鸟嘌呤的测定提供了一种简单、无标记和低复杂度的方法，为更复杂的传感平台提供了一种实用的替代方案。