长链非编码RNA HAND2-AS1在膀胱癌中因表观遗传沉默而下调并在实验模型中发挥抑癌作用

《BMC Urology》：Promoter hypermethylation-associated downregulation of LncRNA HAND2-AS1 in bladder cancer: functional and transcriptomic evidence

摘要

目的

研究长链非编码RNA（lncRNA）HAND2-AS1在膀胱癌（BCa）中的表达模式、表观遗传调控、生物学功能及转录组学关联。

方法

利用TCGA-BLCA数据库检测HAND2-AS1的表达，并通过RT-qPCR在膀胱癌细胞系及28对肿瘤与癌旁膀胱组织中加以验证。采用亚硫酸盐测序PCR（BSP）评估DNA甲基化水平，并使用5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-AZA）作为药物去甲基化干预手段，以评估甲基化敏感的HAND2-AS1表达变化。通过CCK-8细胞增殖实验、Transwell迁移侵袭实验、Annexin V/PI流式细胞术以及裸鼠异种移植瘤实验，对稳定过表达HAND2-AS1的膀胱癌细胞进行功能评估。采用RNA测序，并结合GO、KEGG、Reactome及蛋白质-蛋白质相互作用分析，表征HAND2-AS1相关的转录组学变化。

结果

HAND2-AS1在膀胱癌组织和细胞系中的表达显著降低。BSP结果以及5-AZA处理后内源性HAND2-AS1的明显重新表达，支持启动子甲基化与转录抑制之间存在关联。HAND2-AS1过表达可抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭，促进细胞凋亡，并减少异种移植瘤的生长。RNA测序鉴定出149个差异表达基因（其中106个上调、43个下调），抗病毒反应和干扰素相关生物学过程及通路显著富集。在TCGA-BLCA数据库中，单变量生存曲线显示HAND2-AS1表达与预后之间存在关联，但其方向与实验中观察到的抑癌表型不一致，表明HAND2-AS1的临床预后意义比其细胞自主性功能效应更为复杂。

结论

HAND2-AS1在膀胱癌中表达下调，并在实验模型中表现出抑癌活性。甲基化与5-AZA实验结果共同支持表观遗传抑制是HAND2-AS1下调的重要调控机制。转录组学分析进一步揭示了HAND2-AS1过表达与抗病毒及干扰素相关基因程序之间的联系。HAND2-AS1的临床预后价值仍需通过多因素分析及独立队列进行验证。