《Legal Medicine》：Development of a procedure for the simultaneous detection of mRNA markers in menstrual blood, vaginal fluid, and peripheral blood for the purpose of discriminating between menstruation and traumatic vaginal injury in sexual assault cases
编辑推荐：
•确定外周血（PB）有助于识别伤害性性侵案件。•阴道液（VF）中的月经血（MB）应与PB加以区分。•本研究开发并评估了MB-VF-PB多重RT-PCR方法。•所开发的系统成功地将月经血与其他体液区分开来。•PAEP是一个特异且稳健的月经血标志物，可应用于实际案件检测。引言对犯
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确定外周血（PB）有助于识别伤害性性侵案件。
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阴道液（VF）中的月经血（MB）应与PB加以区分。
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本研究开发并评估了MB-VF-PB多重RT-PCR方法。
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所开发的系统成功地将月经血与其他体液区分开来。
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PAEP是一个特异且稳健的月经血标志物，可应用于实际案件检测。
引言
对犯罪现场残留法医物证中的体液进行鉴定，对于确定犯罪类型以及核实被害人陈述至关重要。在性侵案件中，由于月经或因阴茎、手指或异物插入引起的创伤性出血，阴道液中常检测到血液[1]。虽然阴道创伤可通过对被害人的医学检查加以鉴定[2]、[3]，但如果被害人无法及时报案，则鉴定创伤性损伤可能更为困难。在这种情况下，区分犯罪现场采集的生物样本中月经血与外周血，有助于确定是否发生了具有创伤性损伤的性侵行为[4]。
月经是指子宫内膜脱落并伴随出血的过程。月经血由子宫内膜碎片、阴道及宫颈分泌物、上皮细胞、血液和纤维蛋白溶解产物组成[5]、[6]。在法医样本中鉴定月经血时，通常采用针对D-二聚体或纤维蛋白/纤维蛋白原降解产物（FDP）的免疫层析试验或乳胶凝集试验[7]、[8]、[9]、[10]。然而，由于人体死亡后纤维蛋白溶解活性升高，死后外周血也会显示出较高的D-二聚体或FDP水平[11]、[12]、[13]、[14]、[15]。因此，基于D-二聚体或FDP的试验在鉴定月经血时仅局限于不可能来源于人体的样本。此外，应注意具有高纤维蛋白溶解症的个体，其样本在D-二聚体或FDP检测中可能出现阳性结果[16]。
基于mRNA的体液鉴定方法也已应用于月经血。基质金属蛋白酶等月经血标志物被纳入多重逆转录（RT）-PCR检测中，用于同时区分多种体液[17]、[18]、[19]、[20]、[21]、[22]。然而，这些方法中所采用的月经血标志物有时在其他体液（如精液和唾液）中显示出的值会超过峰值幅度阈值[23]、[24]。因此，应选取更为特异的标志物，并对其进行法医学评估，以精确鉴定月经血。
在先前的研究中，研究人员利用基于TaqMan探针的定量RT-PCR（RT-qPCR）方法，调查并评估了在子宫内膜中特异性表达的新型月经血标志物的可检测性与特异性[25]。孕激素相关子宫内膜蛋白（PAEP）[26]、[27]、[28]、基质金属蛋白酶7（MMP7）[28]、[29]以及左右轴决定因子2（LEFTY2）[30]、[31]被确定为特异性强且稳健的月经血标志物。在本研究中，为了区分月经血与外周血及阴道液，我们构建了"MB-VF-PB多重"系统——一种使用上述月经血标志物以及先前评估的阴道液和外周血标志物的多重RT-PCR系统[32]、[33]。本研究使用各种具有法医学意义的体液和污渍评估了MB-VF-PB多重系统在法医案件中的特异性。此外，还对稀释或混合样本以及在各种条件下保存的月经血污渍进行了检测，以评估MB-VF-PB多重系统在法医案件中的适用性。
部分摘要
体液样本
月经血样本（共n = 31）通过商用卫生巾，从健康女性（n = 11）月经周期的第1至第5天采集的污渍中获得。其中，有8名参与者在月经期间连续2天或以上采集月经血污渍。所有月经血污渍均作为独立样本使用，因为同一参与者采集的样本中各标志物的表达水平变异足够大。本
多重RT-PCR扩增与片段分析
本研究采用所开发的多重RT-PCR检测并结合毛细管电泳及片段分析，同步完成3种月经血标志物、5种阴道液标志物、3种外周血标志物及ACTB的扩增与鉴定（图1）。尽管在非目标体液中检测到了所分析的体液标志物，但其归一化值小于在月经血、阴道液或外周血中的值（图2）。
讨论
本研究开发了MB-VF-PB多重RT-PCR方法，并评估了其在月经血、阴道液和血液中同步检测mRNA标志物的能力，目的是在性侵案件中区分月经与创伤性阴道损伤。阴道液、外周血或混合样本中均未出现阳性月经血标志物。然而，MMP7、LEFTY2、MUC4和HBB在某些样本中被轻微扩增并出现阳性检测
基金支持
本研究的部分工作由日本学术振兴会（JSPS）科学研究补助金（C类）资助（JSPS KAKENHI资助编号21 K10538）。
参与者知情同意
已获得本研究中所有个体参与者签署的书面知情同意声明。
人体伦理
本研究已获机构伦理委员会批准，即国家警察科学研究所伦理委员会（批准编号：33–4(85)；批准日期：2021年6月8日）。所有程序均按照机构及/或国家研究委员会的伦理标准，以及1964年《赫尔辛基宣言》及其后续修正案或类似伦理标准执行。
作者贡献
概念构思、形式分析、研究经费获取、调查研究、方法学、项目管理、监督指导、可视化呈现及初稿撰写：Tomoko Akutsu；调查研究：Takuya Shimura；数据管理：Yuito Takeuchi；资源支持：Ken Watanabe、Saki Minegishi及Koichi Sakurada；结果验证：Takayuki Yamagishi及Kochi Toyomane；文稿审阅与修改：Ken Watanabe、Kochi Toyomane、Takayuki Yamagishi及Koichi Sakurada。
Tomoko Akutsu|Saki Minegishi|Kochi Toyomane|Takayuki Yamagishi|Ken Watanabe|Takuya Shimura|Yuito Takeuchi|Koichi Sakurada
