甘贾姆病毒重组核蛋白间接ELISA检测方法的建立及其在印度小反刍兽血清调查中的应用

《Scientific Reports》：Development and evaluation of indirect-ELISA based on recombinant nucleoprotein for detection of Ganjam virus (GANV) specific antibodies in small ruminants

摘要

甘贾姆病毒（GANV）是一种已被报道在印度发现的蜱传播动物病毒。它是内罗毕绵羊病病毒（NSDV）的亚洲变种，可引起小反刍兽的显著发病率和死亡率。对动物中GANV特异性抗体进行血清学监测对于确定风险图谱和实施控制策略具有重要意义。本研究描述了开发并评估一种基于重组核蛋白（rNP）的间接ELISA方法，用于检测绵羊和山羊群体中的GANV特异性IgG抗体。全长NP基因编码重组NP蛋白（516个氨基酸，57 kDa），在变性条件下从大肠杆菌中克隆、过表达，并通过亲和层析纯化。棋盘滴定法确定最佳抗原浓度为200 ng/孔，测试血清稀释度为1:50，并配合适当的种属特异性HRPO结合物。通过受试者工作特征（ROC）和精确率-召回率分析评估最佳截断标准，结果显示曲线下的面积（AUC）为0.999 [95%置信区间（CI）0.964–1.000]，阳性预测值为1.000，F1得分为0.9691，绵羊和山羊的截断标准> 32 PP。检测方法的重复性显示，检测内变异系数（% CV）为4.61，检测间变异系数（% CV）为12.51，分别在接受标准10%和15%的范围内。此外，该检测方法显示出可靠的检测限高达1:400，且与主要绵羊和山羊疾病的特异性血清无交叉反应。进一步通过贝叶斯双试验分析评估iELISA的诊断性能，显示诊断敏感性为96%，诊断特异性为93%。此外，对印度奥里萨邦小反刍兽群体中随机采集的绵羊（n = 311）和山羊（n = 547）血清进行筛查，显示GANV特异性血清阳性率分别为20.58%和31.08%。总之，开发的GANV-rNP-iELISA方法有可能用于大量小反刍兽血清样本的筛查，以更好地了解该地区对公共健康的潜在风险。