SPLASH：基于标准qPCR仪器实现阿茨海默病血液生物标志物超灵敏定量的固相连接检测平台

《Scientific Reports》：SPLASH: a benchtop platform for accessible, ultrasensitive quantification of plasma biomarkers in Alzheimer’s disease

摘要

基于血液的生物标志物已成为检测和阿茨海默病（AD）等神经退行性疾病监测的一种前景广阔的工具，然而，超灵敏蛋白定量技术的广泛实施仍受限于对专用仪器和集中实验室基础设施的依赖。在此，我们提出了SPLASH（Solid Phase Ligation Assay with Single wasH，即基于固相连接与单次洗脱的邻近连接实验平台），该平台仅使用标准台式qPCR仪器即可实现亚皮克/毫升级的灵敏度。我们开发了五种针对阿茨海默病标志物的检测方案——磷酸化Tau-217（pTau-217）、淀粉样蛋白β1–40（Aβ1–40）、淀粉样蛋白β1–42（Aβ1–42）、神经丝轻链（NfL）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）——检测限范围为0.0005至0.119 pg/mL。在一组经PET显像确定淀粉样蛋白状态的101名参与者中，SPLASH对血浆pTau-217的定量分析能够区分淀粉样蛋白阳性与阴性个体（AUC = 0.839），其性能与三种已确立的pTau-217检测方法相当。我们进一步验证了该平台与干血浆斑样本的兼容性，展示了无需冷链储存即可实现去中心化采集与分析的潜力。我们将多重五组分标志物检测面板应用于69份血浆样本，揭示了与AD相关模式一致的不均匀生物标志物谱。通过消除对专有仪器的依赖，SPLASH推动了超灵敏蛋白定量技术在神经退行性疾病研究与诊断中的广泛应用。