兔子骨髓造血干/祖细胞CD45耗竭、MACS及FACS分选方法的比较研究及其与人类CD34?细胞的异同分析

《Scientific Reports》：A comparative study for the isolation of rabbit phenotypically defined candidate HSPCs based on CD45 or CD34 marker expression

　　

摘要

驻留在骨髓中的兔子造血干/祖细胞（rHSPCs）仍未得到充分表征。通常，人类和动物的HSPCs可通过耗竭成熟的已定向分化造血细胞或通过阳性筛选表达CD34抗原的原始细胞来获得。此前，我们报道了通过耗竭兔子CD45⁺细胞可能富集潜在的rHSPCs。本研究描述了一种改进的耗竭方案，具有更令人满意的细胞纯度。此外，本研究还介绍了使用新型抗兔子CD34单克隆抗体以及MACS或FACS分选来富集表型明确的候选rHSPCs，以便根据分离的rHSPCs质量对这三种方法进行彻底比较。此外，我们使用人骨髓CD34⁺细胞来比较它们与富集的兔子细胞群体在特异性特征和能力方面的差异。经兔子CD45耗竭后，我们获得了高纯度和纯度（p?<?0.001），CD34⁺细胞的MACS和FACS富集也达到了高纯度（p?<?0.0001）。兔子CD45^-细胞和FACS CD34⁺细胞表现出令人满意的活力（>?90%，p?<?0.05），但MACS CD34⁺细胞的活力较低（<?50%；p?<?0.0001）。兔子CD45^-细胞（p?<?0.05）和人的MACS CD34⁺细胞（p?<?0.01）扩增良好，而兔子FACS和MACS CD34⁺细胞扩增不佳。三种不同富集的兔子细胞群体均表现出与人的CD34⁺细胞相似但不完全相同的表型。几乎所有富集的兔子细胞群体（MACS分选除外）均显示出与人的CD34⁺细胞相当的高克隆形成能力，并产生了BFU-E、CFU-E、CFU-GM和CFU-GEMM集落。此外，透射电镜分析显示所有富集的兔子细胞群体的形态和超微结构均与人的CD34⁺细胞相同。本研究中，我们分离出了表型明确的候选rHSPCs亚群，其在纯度、活力、表型、扩增率和克隆形成能力方面略有差异。另一方面，富集的兔子细胞群体在形态和超微结构上与人的HSPCs非常相似。本研究使我们能够从原种霍利克蓝色兔和斯洛伐克灰蓝 rex兔中分离、冷冻保存并储存表型明确的候选rHSPCs，用于动物基因库以供后代研究。关于CD34富集，mAb 58/47/34似乎比其他测试抗体更适合分选操作。然而，仍需进一步研究以改善针对兔子HSPCs的特定扩增方法，或对这些细胞的转录组或分泌组进行分析。此外，本研究的主要局限性在于缺乏体内重.populate实验，该实验可能证实富集的兔子细胞群体确实源自HSPCs。