正交性驱动离线二维液相色谱联用高分辨质谱对人参固本口服液进行全面化学成分表征和质量标志物筛选

《ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY》：Orthogonality-driven offline two-dimensional liquid chromatography coupled with high-resolution mass spectrometry for comprehensive chemical profiling and quality marker screening of Renshen Guben oral liquid

# 摘要传统中成药因其多药材复配、极性范围极大且各成分浓度差异悬殊，带来了严峻的分析挑战，使得常规一维液相色谱-质谱联用技术（1D LC-MS）难以实现全面的质量评价。本研究建立了一种正交驱动型离线二维液相色谱系统（HILIC × RPLC）并串联Q-Orbitrap质谱，用于对人参固本口服液（RSGB）这一含十味药材的临床免疫调节制剂进行深度化学成分谱剖析和合理的质量标志物（Q-marker）筛选。该二维液相色谱平台经系统优化与验证，其成分覆盖率较一维液相色谱-质谱联用提高了约50倍。利用全球天然产物社会分子网络（GNPS）可视化MS/MS谱图相似性关系，促进了13个化学类别中结构相关类似物的可靠注释。共鉴定出260种化合物，其中48种经对照品确证。在此基础上，通过整合网络药理学预测、针对核心免疫相关靶点HSP90AA1的分子对接评估以及十味药材的色谱指纹相关性分析，制定了一套多维质量标志物筛选策略，最终从八味药材中确定了12种化合物作为质量标志物。为应对成分丰度范围宽大的问题，开发了基于三重四极杆质谱的校正多反应监测（MRM）方法，可实现跨三个数量级的同时定量。方法学验证表明，全部12种质量标志物均具有优异的线性（R² > 0.999）以及满意的精密度和重复性。对10个商品批次的定量分析结果显示批次间存在显著差异，其中没食子酸含量最高，21-去乙酰基白桦脂醇B（al isolated B）含量最低，凸显了多组分质量控制的必要性。该整合工作流程架起了全面化学表征与实际定量评估之间的桥梁，为复杂植物制剂的整体质量评价提供了一种可推广的范式。