实蝇Bactrocera zonata六种条件下八种候选内参基因表达稳定性评价

《Scientific Reports》：Enhancing the accuracy of qPCR normalization in Bactrocera zonata: A systematic study for the selection of condition-optimized reference genes for gene expression studies

摘要

Bactrocera zonata（双翅目：实蝇科）是一种高度破坏性的多食性害虫，侵害多种具有重要经济价值的果树作物。了解其生长发育、繁殖特性以及对环境胁迫的响应，对于制定有效的管理策略至关重要。基因表达分析是阐明上述生物学过程分子机制的重要途径。定量实时荧光定量 PCR（qPCR）广泛用于基因表达分析，但需要经过验证的内参基因才能实现准确的标准化。本研究评估了八种候选内参基因（GAPDH、G6PDH、TUBA1A、TUBB、RPL19、EEF1A2、SOD 和 ATP6V0A1）在六种生物学及实验条件下的表达稳定性：性别、组织、发育阶段、伽马射线辐照、温度胁迫和 dsRNA 处理。采用 comparative ΔCt 法和标准差法、geNorm、NormFinder、BestKeeper 及 RefFinder 评估其稳定性。结果表明，GAPDH 在伽马射线辐照和 dsRNA 处理条件下表现出最高稳定性，TUBA1A 在发育阶段和温度胁迫条件下最稳定，RPL19 在成虫雄性和雌性之间最稳定，TUBB 在不同组织间最稳定。这些发现揭示了内参基因稳定性具有条件依赖性，并为B. zonata 中可靠的 qPCR 标准化提供了经验证的内参基因。