CRISPR/Cas9靶向编辑HTLV-1调节因子HBZ对成人T细胞白血病/淋巴瘤细胞的影响

《Scientific Reports》：Targeting the gene encoding human T-cell leukemia virus type 1 basic zip factor via CRISPR/Cas9 potentially affects ATL cell survival

摘要

在此，我们研究了人类T细胞白血病病毒1型（HTLV-1）编码的调控因子HTLV-1碱性zip因子（HBZ）在HTLV-1感染和成人T细胞白血病/淋巴瘤（ATL）中的作用。我们设计了五种靶向HBZ的合成向导RNA（sgRNA），并使用成簇规律间隔短回文重复序列及CRISPR相关蛋白9（CRISPR/Cas9）技术在体外将它们导入ATL细胞系。在所有sgRNA中，sgRNA 171在靶点处引入突变的效率最高，因为在Cas9/sgRNA 171转染的ATL细胞测序克隆中，有70%–80%检测到突变。在Cas9/sgRNA 171转染的细胞中，检测到多种突变类型，包括缺失、替换、插入及其组合。根据预测的肽段序列，大多数突变克隆被预测会破坏HBZ编码序列。使用Cas9/sgRNA 171编辑HBZ后，tax/rex mRNA水平升高。在检测的四个候选人类基因组脱靶位点中，未发现突变。此外，Cas9/sgRNA 171转染的ST-1细胞显示活细胞数量显著减少。这些发现表明，HBZ区域编辑可能与某些ATL细胞系中活细胞数量减少有关，并为进一步研究HBZ在HTLV-1感染细胞和ATL中的作用提供了依据。