基于CRISPR/Cas12a技术的卵形疟原虫两个物种（Pow和Poc）快速鉴别检测系统的建立与临床应用验证

《Malaria Journal》：CRISPR/Cas12a-based method to discriminate Plasmodium ovale wallikeri and Plasmodium ovale curtisi

## 摘要### 背景*卵形疟原虫*（*P. ovale*）是五种已知可感染人类的疟原虫之一。目前研究已确认存在两个遗传学上不同的物种——*卵形疟原虫沃尔科利种*（*Pow*）和*卵形疟原虫库尔蒂种*（*Poc*），两者在人类的致病性和毒力方面存在差异。准确区分这两个物种对于患者的适当管理和流行病学监测至关重要。目前常用的qPCR和血清学检测方法受到成本高、检测时间长以及灵敏度或特异性不足的限制。### 方法我们设计了五个候选crRNA，并从中筛选出两个特异性很高的crRNA，分别构建了针对*Pow*和*Poc*的独立检测系统。随后建立并优化了PCR-CRISPR/Cas12a检测系统，评估了该系统的检测限和特异性，并进一步使用临床样本验证了其检测性能。### 结果*Pow*的CRISPR/Cas12a系统检测限为100拷贝/μL，而*Poc*系统的检测限达到30拷贝/μL，两者之间未观察到交叉反应，表明该检测系统具有高灵敏度和高特异性。我们进一步使用137份输入性疟疾病例的临床样本对该检测方法进行了验证，结果显示：*Poc*的灵敏度为96.77%，特异性为99.05%；*Pow*的灵敏度为83.78%，特异性为100%。### 结论该方法代表了*卵形疟原虫*疟疾分子诊断领域的重要进展。其兼具特异性、操作便捷性以及可适应性等特点，使其成为加强流行病学监测和支持疟疾消除工作的一种极具前景的工具，尤其在疟疾病例管理方面具有显著应用价值。