基于邻近杂交引发的杂交链式反应实现 m6A 甲基化 RNA 的位点特异性非酶检测与成像

《ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY》：Nonenzymatic detection and imaging of m6A-methylated RNA via proximity hybridization-initiated hybridization chain reaction with site-specific recognition

【字体：大中小】 时间：2026年10月10日 来源：ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY 4.1

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　　摘要N6-甲基腺苷 (m6A) 是一种关键的表转录组修饰，涉及肝纤维化和癌症等疾病。在完整细胞中以高分辨率对位点特异性 m6A 甲基化进行成像仍然具有挑战性，因为当前方法通常依赖于酶促连接或引物交换扩增，这需要外部触发剂和温度敏感酶。在本研究中，我们提出了一种无酶扩增策略，即

摘要

N⁶-甲基腺苷 (m6A) 是一种关键的表转录组修饰，涉及肝纤维化和癌症等疾病。在完整细胞中以高分辨率对位点特异性 m6A 甲基化进行成像仍然具有挑战性，因为当前方法通常依赖于酶促连接或引物交换扩增，这需要外部触发剂和温度敏感酶。在本研究中，我们提出了一种无酶扩增策略，即邻近杂交启动的杂交链反应 (PH-HCR)，用于 m6A 甲基化 RNA 的原位可视化。识别目标 RNA 序列和 m6A 修饰的双探针能够依赖于邻近性启动自主 HCR 级联反应，无需任何外源性启动子或酶催化，生成荧光 DNA 纳米线以产生放大信号。PH-HCR 对含有合成 m6A 的转化生长因子 (TGF)-β1 mRNA 达到了 1.22 pM 的检测限，实现了活细胞中 m6A 相关 RNA 变化的可视化，并在单细胞分辨率下揭示了 m6A 相关信号之间的细胞间异质性。该方法适用于不同的 RNA 靶标和细胞类型。通过消除对连接酶、聚合酶或外部触发剂的需求，PH-HCR 提供了一种简单、稳健且生物相容的工具，用于在基础研究和诊断中研究 m6A 修饰 RNA 的时空动态。

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N⁶-甲基腺苷 (m6A) 是一种关键的表转录组修饰，涉及肝纤维化和癌症等疾病。在完整细胞中以高分辨率对位点特异性 m6A 甲基化进行成像仍然具有挑战性，因为当前方法通常依赖于酶促连接或引物交换扩增，这需要外部触发剂和温度敏感酶。在本研究中，我们提出了一种无酶扩增策略，即邻近杂交启动的杂交链反应 (PH-HCR)，用于 m6A 甲基化 RNA 的原位可视化。识别目标 RNA 序列和 m6A 修饰的双探针能够依赖于邻近性启动自主 HCR 级联反应，无需任何外源性启动子或酶催化，生成荧光 DNA 纳米线以产生放大信号。PH-HCR 对含有合成 m6A 的转化生长因子 (TGF)-β1 mRNA 达到了 1.22 pM 的检测限，实现了活细胞中 m6A 相关 RNA 变化的可视化，并在单细胞分辨率下揭示了 m6A 相关信号之间的细胞间异质性。该方法适用于不同的 RNA 靶标和细胞类型。通过消除对连接酶、聚合酶或外部触发剂的需求，PH-HCR 提供了一种简单、稳健且生物相容的工具，用于在基础研究和诊断中研究 m6A 修饰 RNA 的时空动态。