摘要
柯萨奇病毒A4（CV-A4）是儿童手足口病和疱疹性咽峡炎的主要病原体，且与严重并发症相关。然而，目前的检测方法，包括商品化RT-qPCR试剂盒，存在假阴性和假阳性的问题。本研究旨在开发一种灵敏且特异的基于TaqMan的RT-qPCR检测法，用于快速检测CV-A4，靶向覆盖基因型A至D及亚型C1至C5的保守VP1区域，重点针对中国流行的C2亚型。该检测方法使用一系列肠道病毒、流感病毒、腺病毒和鼻病毒进行评估，并使用82份CV-A4阳性样本和100份阴性临床样本与两种商品化试剂盒进行比较。所建立的检测方法显示出高特异性，无交叉反应，检测限为2.1 TCID50当量/mL，且重复性良好（CV ≤ 3.03%）。在临床检测中，该方法在1.5小时内实现了100%的检出率（82/82），且无假阳性，优于两种商品化试剂盒，后两者的阳性检出率分别为91.5%和89.0%，假阳性率分别为0%和1%。这些结果表明，我们的RT-qPCR检测方法在CV-A4检测方面具有更优的灵敏度和特异性，尤其针对C2亚型，是一种有前景的实验室诊断和流行病学监测工具。
