微小RNA miR-219是爪蟾神经胚中神经边界和神经嵴发育所必需的

《Developmental Biology》：MicroRNA miR-219 is required for neural border and neural crest development in Xenopus neurulas

　　以下为该论文的中文翻译：摘要要点：• miR-219 耗竭会扩大神经边界区域，并破坏神经嵴的确定（specification）。• miR-219 耗竭表型可被 miRNA 模拟物所挽救。• miR-219 形态寡核苷酸（morphant）造成的神经边界扩张可被 *pax3* 耗竭部分挽救。• RNA-seq 揭示 miR-219 形态寡核苷酸（morphant）神经嵴中存在特异性基因程序的调控变化。• miR-219 被预测可直接下调神经基因 *Hes5.3*。章节摘要引言神经嵴（NC）是一种多能性的胚胎细胞群体，可分化为体内多种多样的细胞类型和组织（Alkobtawi 和 Monsoro-Burq, 2020）。神经嵴细胞在背侧外胚层（邻近拟神经板区域）被诱导产生后，经历上皮-间充质转化，并从背侧外胚层迁移出来，沿身体前后轴形成不同的迁移细胞流。迁移结束时，神经嵴细胞分化为超过 30 种……结果与讨论为研究 miR-219 在神经嵴发育中的功能，我们采用了多种方法，包括形态寡核苷酸（morpholino）敲低、整体原位杂交以及 RNA-seq。形态寡核苷酸（MOs）通过碱基互补配对来敲低（KD）成熟的 miRNA（Flynt 等, 2017）。非特异性 MO 模拟物（对照模拟物）和错配 MO（miR-219 MM）作为对照使用。利用硫堇蓝染色评估了 miR-219 单侧耗竭对颅部神经嵴发育的影响。伦理所有实验均按照英国东安格利亚大学的相关法律法规及机构指南进行，并经完整的伦理审查与批准，符合英国内政部（Home Office）的规定。胚胎制备与显微注射为获得非洲爪蟾（*X. laevis*）胚胎，雌性先注射 100 单位孕马血清促性腺激素（PMSG）预刺激，再用 500 单位人绒毛膜促性腺激素（hCG）诱发排卵。卵经手工采集并进行体外受精。胚胎在 2% L-半胱氨酸中解胶，于 18°C 培养，并在 3% 右旋糖酐（Ficoll）中对单细胞期胚胎进行显微注射。CRediT 作者贡献声明**Grant Wheeler：**撰写——审阅与编辑，撰写——初稿，指导，资源，项目管理，方法论，形式化分析，概念构想。**Marco Antonaci：**验证，形式化分析，数据整理。**Anne H. Monsoro-Burq：**撰写——审阅与编辑，撰写——初稿，指导，调查研究，形式化分析，概念构想。**Aleksandr Kotov：**软件，形式化分析。**Alice M. Godden：**撰写——审阅与编辑，撰写——初稿，方法论……利益冲突声明? 作者声明，他们不存在任何已知的竞争经济利益或个人关系，这些情况可能被认为会影响本文所报告的工作。致谢我们感谢 Jean-Pierre Saint-Jeannet 教授和 Maggie Walmsley 博士提供质粒，感谢 Andrea Münsterberg 教授和 Simon Moxon 博士的有益讨论，以及 Wheeler、Münsterberg 和 Monsoro-Burq 实验室的支持。EYA1-3'UTR 的荧光素酶传感器构建体由 Münsterberg 实验室的 Camille Viaut 博士构建并慷慨提供用于本实验。本研究由英国研究与创新局（UKRI）生物技术与生物科学研究所诺里奇研究园资助。作者名单：Alice M. Godden | Nicole Ward | Méghane Sittewelle | Rafeeq Mir | Aleksandr Kotov | Marco Antonaci | Anne H. Monsoro-Burq | Grant N. Wheeler