巴西里约热内卢州奶山羊Neospora caninum感染的血清流行病学调查及风险因素分析

《Veterinary Parasitology: Regional Studies and Reports》：Seroepidemiological survey of Neospora caninum infection in dairy goats from Rio de Janeiro state, Brazil

新孢子虫病是一种重要的兽医寄生虫病，由球虫物种 Neospora caninum 引起。N. caninum 寄生可导致家养反刍动物如山羊出现重要的生殖变化，例如流产、死产和新生儿死亡。鉴于上述情况，本研究旨在确定巴西里约热内卢州农场饲养的奶山羊中 N. caninum 感染的血清流行率，并识别这些动物的可能风险因素。研究人员于2020年10月至2022年12月期间，从巴西里约热内卢州 Niterói、Nova Friburgo、Sapucaia、Tanguá、Valen?a 和 Vassouras 市奶牛场饲养的460只奶山羊采集血样。血清样本采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗 N. caninum IgG 抗体，该试验基于该原虫的总可溶性抗原。生产者回答了一份半结构化问卷，包括与农场地理特征、畜群畜牧技术特征，以及生殖、营养和健康管理过程、产奶和后代哺乳相关的流行病学变量数据，以评估 N. caninum 感染的风险因素。总共，所有评估样本中28%（129/460）在ELISA试验中对 N. caninum IgG 血清反应阳性。在分析的农场中，记录到的 N. caninum 血清阳性频率范围为12.5%（25/200）至81.1%（30/37）。最终逻辑回归模型证明 N. caninum 血清阳性与性别、羊舍地面类型、出生体重不足后代、兽医护理频率和哺乳时间之间存在关联（p-value ≤ 0.05）。总体而言，里约热内卢州饲养的奶山羊中较高的 N. caninum 感染血清流行率似乎主要由管理实践决定。旨在中断新孢子虫病流行病学链的更特异性预防和控制措施极为重要，有助于减少经济影响和动物健康影响。据研究人员所知，这是首次报告里约热内卢州饲养山羊中 N. caninum 感染血清流行率的研究。

论文解读：巴西里约热内卢州奶山羊 Neospora caninum 感染的血清流行病学调查及风险因素分析

研究背景：新孢子虫病（neosporosis）是由球虫类原虫 Neospora caninum 引起的重要兽医寄生虫病。N. caninum 为全球分布，与 Toxoplasma gondii 亲缘关系近，犬等犬科动物为终末宿主（definitive host），哺乳动物和鸟类为中间宿主（intermediate host）。寄生虫有三种感染阶段：速殖子、含缓殖子的组织囊、含子孢子的孢子化卵囊。食肉动物摄入缓殖子组织囊感染，草食动物摄入环境中的孢子化卵囊感染；速殖子经胎盘和胎膜可造成垂直传播。新孢子虫病虽非人兽共患病，但有人暴露证据。N. caninum 是牛流产主因之一，犬感染可致神经肌肉表现。巴西多数流行病学研究集中于犬和牛，因影响显著。山羊中可垂直传播，与胎盘病变和自然感染母羊流产相关。奶山羊因生产寿命长，感染风险高于肉山羊。全球山羊新孢子虫病血清流行率约6%，南美最高8.8%；巴西山羊群频率2%–26%。里约热内卢州多种家畜有抗 N. caninum 抗体，包括家犬8.4%–37.6%、肉牛14.7%、奶牛23.3%、绵羊6.2%；但尚无山羊自然暴露的血清流行病学调查。因此，研究人员旨在确定该州奶山羊 N. caninum 感染血清流行率、识别风险因素并表征暴露畜群空间分布。

材料方法：研究经动物伦理委员会批准。依据2020年里约热内卢州山羊总数13,560只、预期50%血清阳性、95%置信水平，计算最少374只，实际纳入460只雄性和雌性、成体和幼体、有或无品种的奶山羊，来自 Niterói、Nova Friburgo、Sapucaia、Tanguá、Valen?a 和 Vassouras 市八个农村奶山羊场。2020年10月至2022年12月颈静脉采血，离心获血清，?20°C保存。血清送实验室用间接ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay）检测抗 N. caninum IgG，基于总可溶性抗原，因无可用 in-house IFAT 且无批准用于小反刍兽商业试剂盒，所选实验室有官方批准用于牛新孢子虫病血清诊断的间接ELISA试剂盒，并验证适应山羊血清。采集时记录动物数据，生产者、兽医或技术管理者回答半结构化问卷，覆盖农场地理、畜牧技术、生殖、营养和健康管理；用QGIS 3.30.1制作分布图。EpiInfo 7.2进行单变量分析（Fisher精确检验或Pearson卡方，p≤0.05），显著变量进入多变量逻辑回归（logistic regression），估计优势比（odds ratio, OR）及95%置信区间（confidence interval, CI）。

研究结果：
3.1. 里约热内卢州奶山羊 N. caninum 感染的血清流行率和空间分布：通过ELISA检测460份血清，28%（129/460）对IgG抗 N. caninum 血清反应阳性。农场间血清阳性频率从12.5%（25/200，Sapucaia市 farm V）至81.1%（30/37，Valen?a市 farm VII）。其他为farm II（Nova Friburgo）17.1%（7/41）、farm IV（Nova Friburgo）18.2%（4/22）、farm III（Nova Friburgo）25.9%（7/27）、farm VIII（Vassouras）40%（14/35）、farm VI（Tanguá）42.5%（20/47）、farm I（Niterói）43.1%（22/51）。空间分布显示，N. caninum 暴露的奶山羊群遍布州内 Metropolitan、Mountain、Southern 地区，但各市采样动物数与血清阳性频率无比例关系。

3.2. 奶山羊群 N. caninum 暴露相关因素调查：通过问卷和单变量分析，27个变量中20个因与血清阳性显著相关（p≤0.05）进入逻辑回归。最终模型显示，N. caninum 血清阳性与性别、羊舍地面类型、出生体重不足后代、兽医护理频率和哺乳时间相关（p≤0.05）。雄性比雌性暴露可能性高2.5倍（OR: 2.57，95% CI 0.97–6.83）；床式羊舍地面山羊比板条式羊舍地面高8倍（OR: 8.98，95% CI 1.43–56）；产低出生体重后代的山羊比正常高5倍（OR: 5.43，95% CI 1.45–20.32）；哺乳时间较短的山羊血清阳性优势比高4倍（OR=4.71，95% CI 2.60–8.53）；每季度或每年接受兽医护理的山羊比每周或每月高1.8倍（OR=1.82，95% CI 1.23–2.70）。所有农场报告有啮齿动物和家犬，周围有林地；所有山羊群接受精料和商业矿物质补充并常规修蹄；常见性別隔离，雄性多在直接接触土壤设施，雌性多在抬高板条式羊舍地面。

讨论与结论：讨论部分指出，本州奶山羊 N. caninum 血清阳性率28%与 Batista et al. (2023) 在 Paraíba 州屠宰肉山羊的28.4%相似，也与其他研究在 Paraíba 州奶山羊的28%相似；但高于巴西其他州及中国、意大利、阿根廷、加那利群岛/西班牙和哥斯达黎加等报道。Suarez et al. (2023) 在阿根廷西北部奶山羊检测到更高血清阳性率36%。比较需谨慎，因环境、管理、血清学技术和 cut-off 不同。本州高血清流行率超过巴西山羊估计10.7%和全球5.9%，为文献最高之一。间接ELISA基于总可溶性抗原，可能与其他 Sarcocystidae 成员交叉反应，降低特异性。ELISA曾被多国用于山羊 N. caninum 抗体调查；IFAT是参考技术，但 cut-off 变异影响比较。空间分布提示环境卵囊污染可能跨区域，但分布不均，感染频率异质性可能与管理实践和环境条件包括犬存在有关。所有农场有家犬，犬是终末宿主，是增加农场动物暴露的主要因素；应减少犬感染，仅提供良好来源商业饲料，防止接触尸体和流产产物，控制犬进入牧场、圈舍、设施和水源。管理实践方面，雄性风险高与 Moore et al. (2007) 阿根廷 La Rioja 山羊和 Sun et al. (2020) 中国云南小反刍兽结果相似，解释尚未明确；可能与雄性圈舍远离雌性、水泥地面或裸地，而雌性在板条式羊舍，且雌性健康管理更严格有关，但需更大雄性样本。床式羊舍地面比板条式更暴露，与 Rodrigues et al. (2021) 在 Maranh?o 州发现板条式羊舍显著关联相反；床式圈舍可能更集中寄生虫抵抗结构。血清阳性山羊产体重不足后代频率更高；繁殖失败、流产史和早期死亡已与山羊 N. caninum 血清阳性相关；妊娠前三分之一感染常致胎儿死亡，后三分之一产生先天感染但临床虚弱或神经症状。新孢子虫病可致山羊生殖改变和经济损失。较长哺乳时间降低血清阳性频率，初乳是新生山羊免疫球蛋白重要来源，可能对 T. gondii 等感染因子起保护作用，抗 N. caninum 抗体可能同样；较长泌乳期和母源抗体转移可能提供一定保护。兽医护理频率与血清阳性相关，定期兽医护理可减少里约热内卢州羊群 N. caninum 暴露，兽医指导管理有助于保持畜群健康。结论翻译：总体而言，里约热内卢州奶山羊中观察到的高 N. caninum 血清流行率似乎主要由有利于原虫在动物间传播的管理实践决定。因此，旨在中断 N. caninum 感染流行病学链的更特异性预防和控制措施，重点针对这些农场饲养的家犬的作用，对于帮助减轻该病造成的经济和动物健康影响极为重要。最后，据研究人员所知，本研究首次报告里约热内卢州饲养山羊中 N. caninum 感染血清流行率。