LC-MS技术在人类样本中检测N-乳酰神经氨酸（Neu5Gc）的动态范围优势及方法比较研究

《Glycobiology》：Multi-Site Quantitative Benchmarking of Neu5Gc-Bearing N-Glycans Using Matrix-Matched LC–MS calibration

　　

摘要

N-乳酰神经氨酸（Neu5Gc）已多次与人类癌症相关联，但在质谱研究中的可靠检测一直难以实现，其低丰度也导致在人类样本研究中检测结果不一致。为解决这一问题，我们在定义混合物中对释放的N-聚糖进行了四个数量级动态范围的测定，这些基线匹配校准曲线已在蛋白质组学和代谢组学中用于评估复杂混合物中的变化，系统地对标了多个LC–MS平台和站点中含Neu5Gc的N-聚糖检测。正交地，采用金标准分析方法——由LC分离的标记单糖进行荧光检测——应用于相同样品，获得了Neu5Gc的绝对浓度。

LC–MS展示了三个或更多数量级的扩展检测范围，同时保留了完整的N-聚糖测量，提高了分析特异性并实现了多种含Neu5Gc的N-聚糖的检测。通过结合正交维度的证据，包括色谱分离、同位素分布匹配和组成确认的MS/MS，LC–MS即使在低丰度下也能自信地将Neu5Gc信号从噪声中解析出来。相比之下，在本文评估的DMB-LC-FLR条件和样品装载量下，动态范围仅限于两个数量级，不足以在商品化的人血清池样中检测到Neu5Gc。这些发现有力地支持了DMB-LC-FLR分析的特异性和灵敏度不足以在人类样本中检测Neu5Gc，因为噪声淹没了Neu5Gc信号。通过建立可复用的对标框架用于未来的糖组学研究，我们旨在使用LC–MS来改进临床样本中Neu5Gc的测量。