基于5HP2O水解稳定枢纽的模块化多功能蛋白质-寡核苷酸偶联物组装策略

《Communications Chemistry》：Modular multifunctional 5HP2O linkers for the versatile assembly of protein-oligonucleotide conjugates

摘要

随着复杂生物治疗药物的不断发展，对单点、多功能蛋白质偶联物的需求日益迫切。当前方法通常存在马来酰亚胺相关的水解不稳定性，或需要多步侵入性蛋白质修饰。在此，我们建立了5-羟基-1,5-二氢-2H-吡咯-2-酮（5HP2O）作为组装多功能蛋白质-寡核苷酸偶联物（POCs）的模块化、水解稳定枢纽。通过2-取代呋喃的一步光氧化合成，这些连接体整合了可调节间隔臂、5HP2O Michael受体、NHS活性酯和次级货物。我们证明，5HP2O功能化的氨基-寡核苷酸（AON）在广泛pH范围内保持完全的水解抗性，简化了中间体的储存。随后的生物偶联产生了比脂肪族马来酰亚胺类似物具有更优异的逆Michael稳定性的构建体。扩展该平台，我们生成了多种异双功能、三功能（点击反应活性和荧光）以及四功能（酶可切割）连接体。我们通过体外偶联物追踪和双反义寡核苷酸偶联物的组装验证了这些工具。