免疫功能正常呼吸系统疾病患者支气管肺泡灌洗液中棘阿米巴、肺孢子菌及微孢子虫的分子检测分析

《Scientific Reports》：Molecular detection of Acanthamoeba genotypes and Pneumocystis jirovecii in bronchoalveolar lavage specimens from immunocompetent patients with respiratory disorders

　　

摘要

机会性病原体如、和已被公认为免疫功能低下患者肺部感染的常见病因。然而，它们在患有呼吸系统疾病的免疫功能正常人群中的流行情况和临床意义仍知之甚少。本研究旨在检测来自伊朗东北部马赞德兰省伊玛姆霍梅尼医院伊朗洛波虫全国登记中心（INRCL）收治的各类呼吸系统疾病免疫功能正常患者支气管肺泡灌洗液（BAL）样本中、和的存在情况。本横断面研究分析了2024年期间从患有呼吸系统疾病的免疫功能正常患者中收集的146份BAL样本。采用酚-氯仿-异戊醇法提取DNA。分子检测采用常规PCR技术，使用属特异性引物（JDP1/JDP2）检测，采用针对ITS区域的巢式PCR检测，采用针对线粒体大亚基rRNA（mtLSU rRNA）基因的检测方法检测。分离株的基因型鉴定通过双向Sanger测序完成，并使用BLASTn对序列进行分析。使用MEGA-x软件构建系统发育树，采用最大似然法和Tamura三参数模型，重复bootstrap值1000次。统计分析使用卡方检验（SPSS v20），P值<0.05视为具有统计学显著性。分子分析在6例病例（4.11%）中检测到，其中5例被归类为T4基因型，1例为T5基因型。所有6例患者均患有慢性呼吸系统基础疾病，以慢性咳嗽为主要症状。此外，在9例患者（6.16%）中检测到，其中1例同时检出 T4基因型。在阳性病例中，大部分居住在农村地区，且均患有既往肺部疾病。在所分析的任何样本中均未检测到属，这可能反映其在免疫功能正常人群中低流行的特点或可能存在方法学局限性。在患有慢性肺部基础疾病的免疫功能正常患者BAL标本中分子检测到（主要为T4基因型）和 DNA，表明这些生物体存在于呼吸道中。在农村居民中的相对较高检出率值得进一步进行流行病学调查。重要的是，单纯PCR阳性不应被解读为临床疾病的决定性证据，这些分子发现的临床意义需要仔细进行临床关联分析。未来的前瞻性纵向随访研究是确定这些定植菌是否在患有既往肺部疾病的免疫功能正常个体中导致疾病进展或加重所必需的。