拉福拉型进行性肌阵挛癫痫小鼠模型血液中外周免疫细胞群体变化

《Brain Research》：Alterations in the populations of peripheral immune cells in the blood of a mouse model of progressive myoclonus epilepsy of Lafora type

　　### 摘要要点- Lafora病小鼠模型的血液样本中含有更高水平的髓系细胞。- 相反，这些样本中含有较低水平的中性粒细胞和B淋巴细胞。### 引言洛福拉病（Lafora disease, LD, OMIM#254780, ORPHA501）是一种罕见且严重的进行性肌阵挛性癫痫形式，其特征是大脑和外周组织中异常不溶性糖原（多聚葡萄糖）的积累，形成所谓的洛福拉体（Lafora bodies, LBs）（Lafora和Glueck, 1911; Yokoi等, 1968）。该病通常在儿童期或青少年早期发病，特征为全身性强直-阵挛性发作、肌阵挛、失神发作和视觉幻觉。病情进展迅速，患者会出现认知能力下降、痴呆以及癫痫发作频率增加，通常在发病后5至15年因癫痫持续状态或吸入性肺炎等并发症导致死亡（Pondrelli等, 2021）。LD是一种常染色体隐性遗传病，由编码葡萄糖磷酸酶洛福林（laforin）的*EPM2A*基因突变，或编码E3-泛素连接酶玛琳（malin）的*NHLRC1*/*EPM2B*基因突变引起。洛福林和玛琳形成一个功能复合体，其中洛福林识别底物，随后由玛琳进行泛素化（Solaz-Fuster等, 2008）。这一共同的分子机制很可能解释了携带任一基因突变的患者所表现出的相似临床症状。洛福林-玛琳复合体通过调节糖原合酶（glycogen synthase）的活性来负向调控糖原合成（Vilchez等, 2007），这为洛福拉病患者中观察到的糖原合成增加提供了机制基础。洛福拉体的积累被认为具有致病性，因为其存在会对细胞代谢造成压力，因为细胞无法降解积累的多聚葡萄糖（综述见Markussen等, 2024; Colpaert等, 2024）。最近，神经炎症被定义为小鼠模型中洛福拉病的第二个标志性特征。我们研究小组报告了在两种洛福拉病小鼠模型的大脑中都存在高水平促炎细胞因子和趋化因子，这些因子由反应性星形胶质细胞和活化的中小胶质细胞产生，并随动物年龄增长而增加（Lahuerta等, 2020）。其他研究小组也证实了这些结果（Sinha等, 2021; Sinha等, 2022）。在后续研究中，我们确定TNF和IL6/Jak2信号通路是这种神经炎症的主要贡献者，并且在外周T淋巴细胞CD4+和CD8+细胞浸润到LD小鼠的脑实质中，促成了这些动物中观察到的神经炎症状态（Rubio等, 2023）。此外，我们在洛福拉小鼠的血液中也检测到CXCL10、CCL20和S100b等促炎介质的水平升高（Rubio等, 2023）。### LD小鼠模型本研究根据西班牙国家科研委员会（CSIC）的《实验动物护理和使用指南》的建议进行，并获得了瓦伦西亚自治区农业、环境、气候变化和农村发展厅的批准。小鼠实验方案获得瓦伦西亚生物医学研究所-CSIC动物伦理委员会批准【许可证编号：IBV-51, 2019/VSC/PEA/0271】。尽最大努力### *Epm2b-/-*小鼠血液中外周免疫细胞水平的变化为了确定*Epm2b-/-*小鼠血清中发现的高水平促炎细胞因子是否与外周免疫细胞群体水平变化相关，我们进行了流式细胞术分析。我们使用了四组不同的抗体组合（表1），检测外周血中的髓系和淋巴系谱系，以评估16月龄*Epm2b-/-*动物与同龄对照组中这些群体的组成和激活状态。首先，我们### 讨论尽管洛福拉病（LD）的标志性特征是异常形式糖原在大脑和外周组织中的积累，但胶质细胞来源的神经炎症是该病的另一特征，因为LD动物模型表现出高反应性星形胶质细胞和活化的中小胶质细胞，高水平促炎介质（Lahuerta等, 2020; Sinha等, 2021; Sinha等, 2022; Rubio等, 2023），以及外周免疫细胞向脑实质的浸润，但### 资金来源本工作得到西班牙科学与创新部PID2023-1481023OB-I00拨款，以及瓦伦西亚自治区Prometeo计划（CIPROM2022/42）向P.S.和M.A.G.G.提供的资助支持；L.B-C.持有瓦伦西亚自治区的博士前资助。### CRediT作者贡献声明**L. Ba?os-Carrión：** 撰写——审阅与编辑，方法论，调查研究。**A. Campos-Rodriguez：** 方法论，调查研究。**M.A. Garcia-Gimeno：** 撰写——审阅与编辑，监督，资金获取，概念构思。**P. Sanz：** 撰写——审阅与编辑，撰写——初稿，监督，资金获取，概念构思。### 利益冲突声明作者声明他们没有已知的与本文所报告工作可能产生影响的竞争性财务利益或个人关系。### 致谢我们感谢Miltenyi Biotec公司的Carlos Zamora博士和Xavier Suarez博士在流式细胞术分析方面提供的专业支持。L. Ba?os-Carrión | A. Campos-Rodriguez | M.A. Garcia-Gimeno | P. Sanz