嵌合重组抗原检测实验感染犬早期及持续的抗克氏锥虫IgG反应性

《Veterinary Parasitology》：Early and sustained anti- Trypanosoma cruzi IgG reactivity in experimentally infected dogs detected with chimeric recombinant antigens

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  IBMP抗原在感染后30天即可检测到犬抗T. cruzi IgG。
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  取决于所用抗原，36只犬中有30至35只在第30天呈阳性反应。
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  四种IBMP抗原在第60天时均显示出接近完全的阳性反应。
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  一种人用商品化ELISA在第30天对36只犬中的26只呈阳性反应，第60天时全部36只犬均呈阳性。
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  IgG阳性反应持续至第180天，跨越急性期和早期慢性期。

引言

恰加斯病由克氏锥虫（Trypanosoma cruzi）引起，在拉丁美洲仍是公共卫生关注的问题，并且由于人口流动、环境变化和传播场景的扩展，在历史上非疫区也日益受到关注（Cucunubá et al., 2024, Ferreira et al., 2025）。除人类外，该感染在疫区的家养和野生哺乳动物中也持续循环（Jansen et al., 2018）。犬在这一循环中占据重要的流行病学地位：它们频繁暴露于锥蝽媒介，与人类同处一居，因此已被用作监测媒介-宿主-环境界面重叠区域T. cruzi循环的哨兵动物（Fontes et al., 2025, Freitas et al., 2022, Oliveira et al., 2025, Ramírez et al., 2013）。犬恰加斯病的研究契合"同一健康"（One Health）视角，即通过动物感染来理解特定区域内的寄生虫循环状况（Moreira et al., 2026）。

尽管犬在恰加斯病流行病学中处于核心地位，但其T. cruzi感染的诊断仍存在分析难题。寄生虫学方法在急性期外的检测能力有限，因此犬的 diagnosis 依赖于血清学检测，但目前尚无针对犬抗T. cruzi抗体常规检测专门验证的商品化检测试剂。现有检测手段要么是实验室自建的，要么是将人用验证过的检测平台未经种属特异性校准即直接挪用（Fontes et al., 2025, Freitas et al., 2022）。在缺乏经验证的参考标准的情况下，潜类别分析（LCA）——一种基于多项不完备检测的联合模式对样本进行分类的概率框架——已成为犬T. cruzi血清诊断的既定分析策略，尤其在与嵌合重组抗原联用时（Fontes et al., 2024, Leony et al., 2019）。

在现有血清学靶标中，四种嵌合重组抗原——IBMP-8.1、IBMP-8.2、IBMP-8.3和IBMP-8.4——结合了来自不同寄生虫蛋白的免疫优势表位，其开发旨在提高诊断效能并减少交叉反应（Santos et al., 2016）。它们在犬血清诊断中的分析性能已在两项累积研究中得到表征：Leony等人（Leony et al., 2019）的第一阶段评估报告了四种分子均具有较高的敏感性和特异性，随后Fontes等人（Fontes et al., 2025）的第二阶段验证确认了其在不同流行病学场景下具有相当的性能。然而，实验感染犬中针对这些靶标的抗T. cruzi IgG阳性反应的时间特征尚未经表征——即何时可检测到阳性反应、其如何演变于早期急性期和慢性期，以及在关键血清转阳窗口期与广泛使用的商品化检测相比表现如何。

了解感染后这些抗原的IgG阳性反应何时出现及其是否持续，对于解读犬T. cruzi感染实验和纵向研究中的血清学结果至关重要。因此，本研究在感染后四个时间点（T0、T30、T60和T180天）使用四种IBMP嵌合抗原对36只实验感染犬进行了抗T. cruzi IgG阳性反应时间特征的表征，同时比较了阳性动物比例和定量反应指数随时间的变化，并以Gold ELISA Chagas检测结果作为外部对照一并报告。研究旨在描述实验感染最初180天（涵盖急性期和慢性期起始）的抗体阳性反应情况，而非估算抗原的诊断准确性或任何犬群中的感染频率。

章节片段

研究设计与血清样本

本研究为纵向研究，对实验感染犬在预定感染后时间点采集的连续血清样本进行了评估（Castro et al., 2023）。共纳入36只混种犬（15只公犬和21只母犬），均为6月龄，出生于巴西米纳斯吉拉斯州乌罗普雷托联邦大学（UFOP）犬舍。所有动物均按标准犬舍管理接受了驱虫治疗和常规疫苗接种。

基于LCA的各时间点血清学分类

在144份血清样本（36只犬×4个时间点）中，基于LCA框架，37份（25.7%）被分类为阴性，107份（74.3%）被分类为阳性。全部36份感染前（T0）样本均被分类为阴性。在T30时，36份样本中有35份被分类为阳性、1份为阴性；该犬在T30时对四种IBMP及Gold ELISA Chagas均无反应，此后则始终呈阳性。T60和T180时全部36份样本均被分类为阳性（表1）。

抗T. cruzi IgG阳性反应的时间特征

对于

讨论

本研究描述了36只实验感染犬在感染后180天内四个时间点的抗T. cruzi IgG阳性反应时间特征，使用了四种嵌合重组抗原IBMP-8.1、IBMP-8.2、IBMP-8.3和IBMP-8.4，并以Gold ELISA Chagas作为外部对照。完整数据集允许在配对纵向设计中同时分析阳性/阴性分类和定量反应指数分布。三项发现

生成式AI及AI辅助技术在稿件撰写过程中的声明

在撰写本作品过程中，作者使用了ChatGPT辅助语言编辑、稿件格式排版、期刊投稿要求对齐以及图形摘要的生成。在使用该工具后，作者对所有AI辅助内容进行了批判性审阅、编辑和必要批准。作者对稿件内容承担全部责任，包括已发表作品的准确性、完整性和科学解读。

资金资助

本研究由巴西高等教育人员改进协调局（CAPES；财务代码001）、INOVA Fiocruz恰加斯病临床项目（VPPCB-001-FIO-22-2-11）、巴伊亚州研究支持基金会——FAPESB/SECTI（通用项目，编号APP0007/2023）、CNPq/DECIT/MS No31/2024（编号442269/2024-2）以及CNPq/IGM-Fiocruz贡萨尔沃·蒙蒂斯研究所卓越研究计划（PROEP-IGM，编号422824/2025-9）资助。NITZ和FLNS由

CRediT作者贡献声明

Jo?o Victor Fran?a Moreira： 写作——审阅与编辑，写作——初稿撰写，验证，软件，方法学，调查研究，形式化分析。Felipe Silva Santos Jesus： 写作——审阅与编辑，方法学，调查研究，形式化分析。Isabela Machado Serrano： 写作——审阅与编辑，软件，方法学。Paola Alejandra Fiorani Celedon： 写作——审阅与编辑，方法学，调查研究。Denis Augusto Argolo Campos： 写作——审阅与编辑，方法学。Claudia Martins

利益冲突声明

作者声明不存在可能影响本文所报告工作的已知竞争性经济利益或个人关系。

致谢

作者感谢FIOCRUZ技术平台网络，特别感谢对结构生物学综合平台（RPT-15A）的使用。

Jo?o Victor Fran?a Moreira|Isabela Machado Serrano|Felipe Silva Santos Jesus|Denis Augusto Argolo Campos|Paola Alejandra Fiorani Celedon|Nilson Ivo Tonin Zanchin|Claudia Martins Carneiro|Alexandre Barbosa Reis|Fred Luciano Neves Santos