# 简单总结 本研究报告了在螯虾非离子氨（NH3）胁迫条件下筛选稳定参考基因的研究。通过转录组筛选与文献整合，选取13个候选基因，利用qPCR结合多种算法（geNorm、NormFinder、BestKeeper、Delta CT、RefFinder）进行稳定性评估，发现**RPL13a、RPS18和EIF4A**在NH3胁迫下表达最稳定，而传统常用的β-actin和GAPDH表现不稳定。研究还表明RPL13a在胚胎发育、卵巢发育、雌雄组织及WSSV感染等多种条件下均保持稳定，具有良好的通用性，可为螯虾不同实验条件下的qPCR分析提供参考基因选择依据

《Biology》：Systematic Screening of Reference Genes for qPCR in Procambarus clarkii: RPL13a Shows Stable Expression Under Non-Ionic Ammonia Stress and Multiple Experimental Conditions

简单总结实时定量PCR（qPCR）结果的可靠性取决于参考基因的稳定表达。然而，螯虾在非离子氨（NH3）胁迫下的合适参考基因尚未得到充分评估。在本研究中，通过整合转录组筛选和文献报告，系统评估了13个候选参考基因在NH3胁迫下的表达稳定性。RPL13a、RPS18和EIF4A在NH3胁迫下表现出最高的整体稳定性。特别重要的是，RPL13a在本研究中检测的胚胎发育阶段、卵巢发育阶段、雌雄组织面板以及WSSV感染条件下也表现出相对稳定的表达。这些发现有助于选择参考基因用于螯虾在特定实验条件下的qPCR分析。摘要实时定量PCR（qPCR）是阐明水生动物环境胁迫响应机制的关键技术，其准确性严重依赖稳定的参考基因进行数据归一化。在本研究中，组织病理学检查显示，螯虾在NH3胁迫后鳃、肝胰腺和肌肉组织发生了改变。基于转录组筛选和文献报道的参考基因，选择了13个候选参考基因。使用qPCR检测了NH3胁迫前后8种不同组织中这些基因的表达水平，并使用包括geNorm、NormFinder、BestKeeper、Delta CT和RefFinder在内的多种算法系统评估了其稳定性。结果鉴定出60S核糖体蛋白L13a（RPL13a）、核糖体蛋白S18（RPS18）和真核翻译起始因子4A（EIF4A）作为NH3胁迫下最稳定的三个候选基因，而传统使用的参考基因β-actin和甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）在这些条件下表现出相对不稳定的表达。geNorm成对变异分析表明，引入第三个参考基因可以进一步改善归一化。使用四个NH3响应基因进行验证表明，(RPL13a + RPS18)和(RPL13a + RPS18 + EIF4A)产生了相似的log2倍数变化估计值，支持它们在测试条件下作为归一化选项使用。值得注意的是，RPL13a在四种条件下保持高度稳定：不同胚胎发育阶段、不同卵巢发育阶段、雌雄组织，以及白斑综合征病毒（WSSV）感染后。这些发现有助于选择并验证参考基因，用于螯虾在特定实验条件下的qPCR分析。