《Discover Public Health》：Detection and species diversity of nontuberculous mycobacteria among patients investigated for tuberculosis at the National Tuberculosis Reference Laboratory, Maputo, Mozambique
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背景：非结核分枝杆菌（nontuberculous mycobacteria, NTM）可模拟结核病，尤其在免疫受损个体中，在高结核病负担地区使诊断复杂化。当菌种水平鉴定和临床相关性有限时，实验室检测NTM可能导致诊断不确定性。本研究评估了转送至莫桑比克国家结
背景：非结核分枝杆菌（nontuberculous mycobacteria, NTM）可模拟结核病，尤其在免疫受损个体中，在高结核病负担地区使诊断复杂化。当菌种水平鉴定和临床相关性有限时，实验室检测NTM可能导致诊断不确定性。本研究评估了转送至莫桑比克国家结核病参考实验室（National Tuberculosis Reference Laboratory, NTRL）的临床标本中NTM的检测率和物种多样性。
方法：研究人员开展了一项回顾性横断面分析研究，使用基于实验室的二手数据。筛选DISA Laboratory Information System（DISA实验室信息系统）后，纳入2015年至2020年间具有可解释分子鉴定结果的334份记录。分子结果不确定或不可解释的记录被排除；无法获得的个体人口学、地理或标本变量保留为未指定/未知。数据使用IBM SPSS Statistics version 20分析。NTM使用GenoType Mycobacterium CM和AS线性探针分析（line probe assays, LPAs）鉴定，并根据文献中已确立的临床相关性进行操作分类。
结果：34.4%（115/334；95% CI，29.5–39.7）的标本检出NTM，而65.6%（219/334）未检出NTM。具有临床相关性的NTM占24.3%（81/334），低/有限临床相关性的NTM占0.9%（3/334），9.3%（31/334）报告为Mycobacterium spp.且无种水平鉴定。鉴定出九种NTM物种或物种群，以M. intracellulare（11.4%）和M. fortuitum（5.7%）为主，其次为M. scrofulaceum（2.7%）和M. abscessus complex（2.1%）。大多数标本为肺部标本（311/334），来自男性（193/334），年龄15–60岁（263/334），主要来自Maputo City和Province。NTM检测与转诊时结核病分类（p < 0.001）和年龄组（p = 0.005）显著相关，但与性别或标本类型无关。
结论：相当比例的标本产生了多样的NTM物种。然而，有限的临床和纵向数据妨碍了区分定植或污染与NTM疾病。分子物种水平诊断可改善NTM-结核分枝杆菌复合群（Mycobacterium tuberculosis complex, MTBC）区分，并支持结核病流行地区的适当临床管理。
研究人员在论文中围绕莫桑比克结核病（tuberculosis, TB）高负担背景下非结核分枝杆菌（nontuberculous mycobacteria, NTM）的实验室检测与物种多样性展开研究。结核病仍是全球尤其是低中收入国家的重要传染病负担，撒哈拉以南非洲的HIV（human immunodeficiency virus，人类免疫缺陷病毒）共感染加重疾病负担。莫桑比克估计发病率超过300/100,000，并在诊断、治疗和控制方面面临挑战。NTM是水、土壤和生物膜中的环境微生物，一般不人际传播，但可在免疫受损者中引起机会性感染，其临床表现可模拟肺部和肺外结核，导致误诊或延迟治疗。将NTM误认为结核分枝杆菌复合群（Mycobacterium tuberculosis complex, MTBC）可造成不恰当或延迟治疗，影响患者结局并增加抗结核药物暴露。高TB负担地区常缺乏种水平鉴别能力，非洲等地报告疑似TB病例中NTM检出率约4%至25%以上。GenoType Mycobacterium CM/AS线性探针分析（line probe assays, LPAs）可区分MTBC与多种NTM并鉴定部分物种，但莫桑比克关于NTM检测率和物种多样性的数据仍有限。因此，研究人员旨在确定2015—2020年转诊至马普托国家结核病参考实验室（National Tuberculosis Reference Laboratory, NTRL）的肺部和肺外临床标本中NTM检测率及物种多样性。
研究人员开展回顾性横断面分析研究，使用NTRL的DISA Laboratory Information System（DISA实验室信息系统）二手数据，纳入334条具有可解释分子鉴定结果的记录，排除不确定或不可解释结果；无法获得的变量保留为未指定/未知。数据显示NTM检出率为34.4%，鉴定出九种NTM物种或物种群，以
M. intracellulare和
M. fortuitum为主。研究结论提示NTM在该实验室结核病检查人群中频繁检出且物种多样，但有限临床和纵向数据妨碍区分定植、污染与NTM疾病。其意义在于支持加强实验室对NTM与MTBC的准确区分、扩大分子种水平鉴定，并整合临床、影像和微生物学标准开展前瞻性研究。
关键技术方法概述：研究人员采用回顾性横断面分析设计，样本队列来源于2015—2020年转诊至莫桑比克马普托NTRL并录入DISA实验室信息系统的临床标本记录；筛选后纳入334条具有可解释分子鉴定结果的记录。NTM鉴定使用GenoType Mycobacterium CM和AS LPAs，基于23S rRNA基因特定区域的多重聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）扩增和反向杂交，以区分MTBC与NTM并鉴定部分NTM物种或物种群。数据用IBM SPSS Statistics version 20分析，分类变量以频率和百分比描述，检测率计算Wilson法95%置信区间（confidence interval, CI），关联分析采用Pearson χ2检验、Fisher精确检验或Fisher-Freeman-Halton精确检验，显著性水平p < 0.05；NTM按文献临床相关性进行操作性分类。
3.1 研究人群特征：通过汇总DISA实验室记录，研究人员发现334条记录中男性57.8%、女性41.6%；15—60岁占78.7%，>60岁14.4%，<15岁5.1%。标本主要来自Maputo City（62.3%），其他省21.0%；肺部标本93.1%。转诊时TB分类包括新病例26.3%、复治12.9%、复发3.0%、治疗失败0.3%、疑似多药耐药结核病（multidrug-resistant TB, MDR-TB）12.3%、MDR-TB 22.8%、未指定22.5%。
3.2 非结核分枝杆菌的检测与分布：通过GenoType CM/AS分子鉴定和按临床相关性操作分类，研究人员发现115/334（34.4%；95% CI，29.5—39.7）检出NTM，65.6%未检出。临床相关NTM占24.3%，低/有限临床相关性占0.9%，9.3%仅报告为
Mycobacterium spp.。九种NTM物种或群中，
M. intracellulare 11.4%、
M. fortuitum 5.7%、
M. scrofulaceum 2.7%、
M. abscessus complex 2.1%，
M. malmoense和
M. szulgai各0.9%，
M. chelonae和
M. interjectum各0.3%；
M. gordonae 0.9%归为低/有限临床相关性。
3.3 按人口学和临床特征分布：通过χ2/Fisher检验，研究人员发现NTM检测在男性35.2%、女性32.4%，性别无显著关联（p = 0.127）；年龄组差异显著（p = 0.005），<15岁最高；肺部35.4%、肺外20.0%，标本类型无显著关联（p = 0.444），NTM阳性中95.7%为肺部。转诊TB分类与NTM检测显著相关（p < 0.001），复治53.5%、MDR-TB 51.3%，新病例22.7%；MDR-TB转诊中
M. intracellulare 15株、
M. fortuitum 8株、
M. scrofulaceum 5株。因缺临床和影像资料，不能判定定植、污染或NTM疾病。
讨论部分，研究人员指出，34.4%的检测率高于非洲和亚洲部分研究报告的约4%—30%，但直接比较需谨慎，因研究设计、转诊模式、培养技术和分子鉴定方法不同。CM/AS LPA可快速鉴定MTBC和部分NTM，但物种覆盖有限。NTRL常规诊断包括抗酸杆菌（acid-fast bacilli, AFB）显微镜、培养、药物敏感性试验（drug susceptibility testing, DST）和分子检测，但本回顾性数据无法确定每个AFB或培养阳性标本是否均行LPA。检测到NTM不等于NTM病，因缺少症状、影像、微生物学疾病标准和纵向治疗反应。
M. intracellulare占优与多个地区鸟分枝杆菌复合群（Mycobacterium avium complex, MAC）是重要肺部NTM的报道相符；
M. fortuitum、
M. scrofulaceum和
M. abscessus complex亦具临床相关性；
M. gordonae通常低/有限临床相关性，可能为环境污染或短暂定植。约四分之一标本为临床相关NTM，31株仅报告为
Mycobacterium spp.，反映LPA覆盖限制，测序可改善鉴定。年龄组显著但<15岁仅17条，需谨慎；性别无显著，男性居多可能反映TB检查人群和转诊模式而非易感性差异。肺部标本占绝大多数。复治和MDR-TB转诊检出率较高可能反映复杂临床背景和诊断复杂性，但不能推断因果或治疗失败。地理集中在Maputo City和Province与NTRL位置和转诊机构一致。研究优势包括标准化分子鉴定、五年研究期和多省转诊标本；局限包括回顾性实验室设计缺HIV状态、症状、影像、治疗结局和ATS/ERS/ESCMID/IDSA诊断标准（美国胸科学会/欧洲呼吸学会/欧洲临床微生物与感染病学会/美国感染病学会标准），转诊偏倚，LPA物种覆盖有限，非人群抽样，故34.4%不应解释为人群患病率。需要前瞻性多中心整合临床、微生物、影像和分子数据研究。
结论部分翻译：本研究证明莫桑比克接受结核病检查的标本中NTM频繁检出且物种多样性显著。NTM检测与年龄组和转诊时TB分类显著相关，与性别或标本类型无显著相关。结果支持加强实验室准确区分NTM和MTBC的能力并扩大分子鉴定。由于仅NTM检测不能确定临床疾病，未来前瞻性研究应整合临床、影像和微生物学标准，以确定NTM疾病负担及其对莫桑比克TB诊断和治疗的影响。
