扩展EP-QuIC检测对加拿大局部地区散发性克雅氏病监测的改善作用

《Canadian Journal of Neurological Sciences》：Expanded EP-QuIC Testing for Sporadic CJD in a Local Geographic Area of Canada Results in Improved Surveillance

　　

背景：散发性克雅氏病(sCJD)的诊断传统上依赖于非特异性脑脊液(CSF)生物标志物，如14-3-3γ和总tau。QuIC试验的发展使得直接检测朊病毒种子成为可能，提高了死前诊断的准确性。研究人员此前注意到加拿大新不伦瑞克省(NB)的脑脊液送检率较高，并利用这一观察结果评估扩展区域检测对朊病毒病监测及EP-QuIC诊断性能的影响。方法：研究考虑了2016年至2024年间所有省份送检至加拿大公共卫生署国家微生物学实验室的脑脊液样本，并结合生物标志物谱和患者人口统计学特征分析了EP-QuIC结果。研究人员检查了生化亚型分布，以评估检测密度增加是否有助于检出临床表现为非典型亚型的病例。结果：脑脊液样本为评估高送检率队列中的EP-QuIC性能提供了机会。EP-QuIC保持了较高的诊断可靠性，即使在临床怀疑度预期较低的情况下也表现出强劲性能。此外，观察到VV2病例的数量略有增加，这表明更广泛的检测可能有助于识别那些最初不符合典型CJD标准、否则可能被低估的sCJD亚型。结论：区域扩展的EP-QuIC检测支持更完善的朊病毒病监测，并在不同临床背景下保持较高的诊断准确性。检测密度的增加还可能提高某些sCJD亚型的检出率，凸显了扩大EP-QuIC检测可及性的价值。

**研究背景与目的**
散发性克雅氏病(sCJD)是一种由正常朊蛋白(PrP)自发错误折叠引起的致命性朊病毒病，其诊断长期依赖脑脊液(cerebrospinal fluid, CSF)中非特异性生物标志物如14-3-3γ和总tau，并结合临床表现与影像学特征。近年来，基于震动诱导转化(QuIC)技术的检测方法能够直接识别CSF中的致病性朊病毒种子，显著提高了生前诊断准确性。加拿大全国范围内的CSF样本统一由公共卫生署国家微生物学实验室集中检测，且样本接收不受临床标准限制。此前研究人员观察到新不伦瑞克省(New Brunswick, NB)的CSF送检率是加拿大全国人均水平的5倍以上，这与当地一种未知来源神经系统综合征(NSUC)的调查有关，尽管后续独立评估否定了该综合征为一种新型疾病，但这一高送检率现象为评估扩大检测密度对监测体系和诊断性能的影响提供了独特条件。本研究旨在比较2016年至2024年间NB省与加拿大其他省份的送检样本特征，探讨扩大的EP-QuIC检测是否影响患者人口学特征、14-3-3γ与总tau水平以及sCJD分子亚型的检出，并评估在临床怀疑度较低的群体中扩展检测是否会增加假阳性结果。

**研究设计与核心方法**
研究人员提取了加拿大各省在2016年至2024年间送检至国家微生物学实验室的CSF检测记录，排除血性或黄变样本及携带致病性PRNP突变的遗传性病例，共纳入2743名个体样本。实验室检测包括EP-QuIC、14-3-3γ和总tau平行检测，14-3-3γ采用Circulex ELISA试剂盒，总tau采用Innotest hTAU ELISA试剂盒，EP-QuIC使用室内纯化的叙利亚金仓鼠全长PrP底物(残基23–231)。使用Western blot对尸检脑组织进行蛋白酶抗性PrP糖型分析以确定分子亚型。统计学方面，按2011年加拿大人口标准进行年龄直接调整计算各年龄层发病密度，采用广义线性模型比较各省生物标志物水平及患者年龄差异，并以EP-QuIC状态作为参考标准计算14-3-3γ和总tau的灵敏度、特异度、阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV)。

**主要研究结果**
**NB省患者人口统计学特征与加拿大其他省份存在差异**：研究期间NB省共有309份CSF样本送检，年龄调整后年送检率为36.9/百万，远高于全国平均的7.23/百万。EP-QuIC阴性样本中，NB省患者年龄显著低于多数其他省份；而EP-QuIC阳性样本的年龄分布未见明显差异，表明阳性病例仍出现在典型发病年龄人群中。NB省送检样本的性别比例与全国无显著差异。

**EP-QuIC阴性样本的替代生物标志物水平在各省间显著不同**：在EP-QuIC阴性样本中，NB省的14-3-3γ和总tau水平均为全国各省中最低。而在EP-QuIC阳性样本中，各省间的两种生物标志物水平未见显著差异。这表明NB省扩大的送检范围纳入了更多神经元损伤程度较低的非典型临床病例。

**各省样本的检测性能指标存在差异**：以EP-QuIC结果为参照，NB省14-3-3γ和总tau检测的阳性预测值均为全国最低(分别为0.50和0.48)，但特异性为全加拿大最高(分别为0.95和0.93)。这一现象归因于受检人群中疾病患病率因扩大检测而稀释，而非检测本身性能下降。

**与NB病例相关的尸检数据**：21例NB省EP-QuIC阳性样本中有19例接受了神经病理学和/或Western blot检查，其中16例Western blot阳性、19例神经病理学阳性，EP-QuIC在该队列中的特异性为100%。1例EP-QuIC不确定样本经两种方法均证实为CJD。Western blot亚型分型显示NB省的16例确诊或不确定样本中包括4例MM1(25%)、4例MV1(25%)、6例VV2(37%)、1例MM2(6%)和1例混合MV(6%)。VV2在NB省所占比例高于AB、BC、MB、ON和QC等省份(分别为17%、14%、6%、17%和21%)，尽管病例数较少无法达到统计学意义，但该趋势提示扩大检测有助于捕获临床上易被忽视的2型CJD亚型。

**讨论与结论**
QuIC系列检测特异性接近100%，通常用于符合典型CJD临床标准的疑似病例，然而约15%–20%的CJD病例表现非典型，容易与其他神经系统疾病混淆。本研究利用NB省异常的高送检率，首次在实际临床队列中评估了扩大检测的影响。结果显示，即使纳入更多临床表现不符合经典标准的个体，EP-QuIC仍未出现假阳性，且维持高诊断可靠性。较低的14-3-3γ和总tau水平以及较年轻的患者年龄证实，NB省的送检人群确实包含了更广泛的神经系统疾病谱。VV2亚型比例的升高也支持扩大检测可促进非典型sCJD亚型识别的观点。此外，在罕见病背景下，受检人群中疾病患病率降低会导致14-3-3γ和总tau的PPV下降，但特异性提高，这一现象应被监测计划所理解。研究人员最后指出，随着监测重点从变异型CJD转向慢性消耗性疾病(CWD)等新兴朊病毒病，以EP-QuIC为代表的特异性检测技术将在聚焦人群的强化监测和扩大筛查策略中发挥关键作用。本研究的结论是：区域扩展的EP-QuIC检测有助于建立更稳健的朊病毒病监测体系，并在不同临床场景下保持高诊断准确性；增加检测密度可改善某些sCJD亚型的检出，故应提高EP-QuIC检测的可及性。