《Histochemistry and Cell Biology》：August in focus in HCB: biomarker expression in specific tumor cell types
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欢迎阅读2026年8月HCB焦点社论，本社论重点介绍两篇研究论文，分别描述免疫组织化学染色（immunohistochemical staining, IHC）：(1) 在甲状腺癌亚型中检测cleaved caspase 3，这些亚型包括甲状腺乳头状癌（pap
欢迎阅读2026年8月HCB焦点社论，本社论重点介绍两篇研究论文，分别描述免疫组织化学染色（immunohistochemical staining, IHC）：(1) 在甲状腺癌亚型中检测cleaved caspase 3，这些亚型包括甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma, PTC）、甲状腺滤泡癌（follicular thyroid carcinoma, FTC）、低分化甲状腺癌（poorly differentiated thyroid carcinoma, PDTC）和未分化甲状腺癌（anaplastic thyroid carcinoma, ATC）；以及(2) 在Merkel细胞癌（Merkel-cell carcinoma, MCC）中检测核纤层蛋白（nuclear lamins）。研究人员希望读者喜欢阅读这些有趣的转化研究调查！
甲状腺癌中cleaved caspase 3的质膜染色提示侵袭性而非凋亡
在历史上用于正向识别凋亡细胞死亡的若干探针中，针对新表位cleaved caspase 3（CC3；由酶原caspase 3剪切产生）的抗体已被证明高度特异且有效。使用抗cleaved caspase 3（CC3）抗体的免疫染色通常局限于细胞质，偶尔见于发生凋亡级联反应的细胞核中，这反映该酶执行细胞死亡活动的细胞内位置。现在，Kashimoto及同事（2026）证明，两种充分表征的CC3抗体（一种兔多克隆抗体和一种兔单克隆抗体）可结合未分化甲状腺癌（ATC）细胞的质膜。其良好对照的免疫组织化学转化研究的总体目标是：(1) 表征甲状腺癌亚型中核/细胞质CC3（n/cCC3）和膜CC3（mCC3）表达；(2) 确定抗CC3免疫染色的细胞内位置是否有助于区分ATC与其他甲状腺癌类型；(3) 揭示CC3免疫染色、肿瘤增殖、肿瘤大小和干性之间的潜在关系。该研究包括对20例PTC、20例FTC、20例PDTC和20例ATC石蜡切片进行免疫染色。部分切片还用抗Ki-67抗体染色，以评估CC3表达与细胞增殖之间的关系。此外，研究人员进行了双重免疫荧光实验，使用抗CC3抗体以及抗Ki-67（增殖）或抗SOX2（评估细胞干性）抗体。抗CC3抗体特异性的对照实验包括western blotting以及用阻断肽或重组人CC3肽进行抗体预吸收。其结果可总结如下：(1) 与PTC、FTC和PDTC相比，ATC中CC3表达（n/cCC3和mCC3）均显著更高；(2) mCC3是ATC的强诊断生物标志物；(3) mCC3与更侵袭性肿瘤行为相关，表现为其与Ki-67免疫染色相关以及作为较大肿瘤的风险因素；(4) 通过双重免疫荧光染色，CC3阳性的单个ATC细胞Ki-67阴性，但偶有SOX2阳性。其发现最令人惊讶的方面是某些ATC细胞中存在mCC3免疫染色模式。有趣的是，从形态学看，这些细胞未显示任何特征性凋亡表型，提示mCC3免疫染色代表脱靶结合现象。肽/蛋白预吸收对照显示，在较高蛋白浓度下组织抗体染色丢失。此外，来自ATC样本的western blot结果显示，除预期的17 kDa CC3条带外，还在70 kDa处出现强条带。作者推测，mCC3免疫染色模式可能代表一种未知的凋亡相关蛋白的存在，该蛋白具有与CC3本身共同的表位。值得注意的是，预吸收对照不能排除抗体与可能与目标抗原共享共同表位的无关蛋白结合。有趣的是，在抗体制造商网站上，CC3抗体的产品信息指出：“该抗体通过western blot检测非特异性caspase底物。在固定冰冻组织的特定健康细胞亚型（例如胰腺α细胞）中，通过免疫荧光可能观察到非特异性标记。”这种非特异性检测代表什么蛋白尚不清楚；然而，作者计划进行质谱法，以尝试鉴定用抗CC3抗体在质膜上检测到的分子。该研究再次说明，研究人员应付出实验努力来验证即使使用充分表征和验证的抗体所获得的免疫染色模式。更多示例见2026年1月HCB焦点社论。
Merkel细胞癌与核纤层蛋白
核纤层是核膜内表面的一种纤丝网状结构，由A/C型和B型核纤层蛋白以及核纤层蛋白相关蛋白组成。核纤层的功能多样，核纤层蛋白突变不仅影响核形状和稳定性，还导致多种疾病，包括肌营养不良和progery综合征。在不同类型癌症中已检测到不同的核纤层蛋白表达模式，并发现其与高迁移潜力以及癌症进展相关。在此，Stiekema及同事（2026）报告了对28例Merkel细胞癌（MCC）患者38份组织样本切片中核A型和B型核纤层蛋白进行半定量免疫组织化学分析的结果。此外，还进行了Merkel细胞多瘤病毒大T抗原（MCPyV-LT）和细胞角蛋白20（皮肤Merkel细胞标志物）以及突触素和嗜铬粒蛋白的免疫染色。对MCC组织中心部分的分析显示，核膜中A型核纤层蛋白（lamin A、C和A/C）免疫染色普遍较低，而B型核纤层蛋白（lamin B1和B2）免疫染色较高。MCPyV阳性和MCPyV阴性MCC之间核纤层蛋白免疫染色无差异。在淋巴结转移中，A型核纤层蛋白免疫染色普遍较高但明显变化；引用作者的话，“比较配对病例显示A型核纤层蛋白表达具有灵活性，与原发性肿瘤相比，转移灶中可更高或更低。”由此推断原发肿瘤及其转移灶中A型核纤层蛋白免疫染色与MCC细胞迁移行为可能相关。此外，作者强调，与皮肤Merkel细胞中A型和B型核纤层蛋白通常强免疫染色相比，原发肿瘤中观察到的A型核纤层蛋白低表达，以及转移性MCC中A型核纤层蛋白高表达，应在Merkel细胞癌发生中予以认真考虑。最后，研究指出，A型核纤层蛋白表达的灵活性是与MCC侵袭性相关的重要发现。
论文解读：HCB 2026年8月焦点——特定肿瘤细胞类型中的生物标志物表达
研究背景与问题
免疫组织化学染色（IHC）是肿瘤病理中检测特定蛋白表达和定位的重要方法。历史上用于正向识别凋亡细胞死亡的探针中，针对cleaved caspase 3（CC3；由酶原caspase 3剪切生成的新表位）的抗体具有高度特异性和有效性。通常，抗CC3免疫染色局限于细胞质，偶尔见于发生凋亡级联的细胞核，反映该酶执行细胞死亡活动的胞内位置。然而，Kashimoto等报告两种充分表征的CC3抗体在未分化甲状腺癌（ATC）细胞质膜结合。甲状腺癌亚型包括甲状腺乳头状癌（PTC）、甲状腺滤泡癌（FTC）、低分化甲状腺癌（PDTC）和ATC。该研究试图表征甲状腺癌亚型中核/胞质CC3（n/cCC3）和膜CC3（mCC3）表达，确定抗CC3免疫染色的细胞内定位是否有助于区分ATC与其他甲状腺癌类型，并揭示CC3免疫染色、肿瘤增殖、肿瘤大小和干性之间的关系。另一方面，核纤层是核膜内表面的纤丝网，由A/C型和B型核纤层蛋白及核纤层相关蛋白组成，功能多样；核纤层蛋白突变影响核形状和稳定性，并导致肌营养不良和progery综合征等疾病。不同癌症中核纤层蛋白表达模式变化与高迁移潜力和癌症进展相关。Stiekema等对Merkel细胞癌（MCC）中核A型和B型核纤层蛋白进行半定量IHC分析，并检测MCPyV-LT、细胞角蛋白20（CK20）、突触素和嗜铬粒蛋白，以探讨其与MCC癌发生和侵袭性的关系。
研究人员开展的研究、结论和意义
Kashimoto等开展良好对照的免疫组织化学转化研究，包括20例PTC、20例FTC、20例PDTC和20例ATC石蜡切片；部分切片用抗Ki-67抗体染色评估增殖；双免疫荧光用抗CC3与抗Ki-67或抗SOX2（干性）抗体；对照包括western blotting和抗体预吸收。结果显示，ATC中n/cCC3和mCC3均显著高于PTC、FTC和PDTC；mCC3是ATC强诊断生物标志物；mCC3与Ki-67免疫染色相关，并作为较大肿瘤风险因素，与更侵袭性肿瘤行为相关；双免疫荧光中，CC3阳性单个ATC细胞Ki-67阴性，但偶SOX2阳性。最令人惊讶的是部分ATC细胞出现mCC3免疫染色，但形态上无特征性凋亡表型，提示脱靶结合。预吸收对照在高蛋白浓度下组织抗体染色丢失；ATC样本western blot除预期17 kDa CC3条带外，在70 kDa处有强条带。作者推测mCC3免疫染色可能代表未知凋亡相关蛋白，其具有与CC3共同的表位；预吸收对照不能排除抗体与共享表位的无关蛋白结合。抗体制造商网站指出该CC3抗体可通过western blot检测非特异性caspase底物，并可在固定冰冻组织特定健康细胞亚型（如胰腺α细胞）中观察到非特异性免疫荧光标记。该非特异性检测代表何种蛋白尚不清楚，作者计划用质谱法鉴定抗CC3抗体在质膜检测到的分子。该研究说明，即使使用充分表征和验证的抗体，也需通过实验验证免疫染色模式。Stiekema等对28例MCC患者38份组织样本进行半定量IHC，检测A型（lamin A、C、A/C）和B型（lamin B1、B2）核纤层蛋白，并检测MCPyV-LT、CK20、突触素和嗜铬粒蛋白。结果显示，MCC组织中心部分A型核纤层蛋白在核膜中普遍低表达，B型核纤层蛋白高表达；MCPyV阳性与阴性MCC间无差异；淋巴结转移中A型核纤层蛋白普遍高表达但明显变化，配对病例比较显示A型核纤层蛋白表达具有灵活性，转移灶可高于或低于原发肿瘤。作者推断原发肿瘤及其转移灶中A型核纤层蛋白免疫染色与MCC细胞迁移行为可能相关。作者强调，与皮肤Merkel细胞中A型和B型核纤层蛋白通常强免疫染色相比，原发肿瘤A型核纤层蛋白低表达、转移性MCC A型核纤层蛋白高表达，应在Merkel细胞癌发生中认真考虑；A型核纤层蛋白表达的灵活性是与MCC侵袭性相关的重要发现。
关键技术方法
甲状腺癌研究使用20例PTC、20例FTC、20例PDTC和20例ATC石蜡切片，进行IHC、Ki-67染色、CC3与Ki-67或SOX2双重免疫荧光、western blotting及抗体预吸收。MCC研究使用28例患者38份MCC组织样本，进行半定量IHC检测A/B型核纤层蛋白，并检测MCPyV-LT、CK20、突触素和嗜铬粒蛋白。
研究结果
甲状腺癌中cleaved caspase 3的质膜染色提示侵袭性而非凋亡
通过IHC和双免疫荧光，研究发现ATC中n/cCC3和mCC3显著高于PTC、FTC和PDTC，mCC3可作为ATC强诊断生物标志物；mCC3与Ki-67相关并增加较大肿瘤风险，提示侵袭性；CC3阳性ATC细胞Ki-67阴性而偶SOX2阳性；mCC3阳性细胞无凋亡形态，结合预吸收和western blot 70 kDa条带，提示脱靶结合和未知凋亡相关蛋白，计划质谱鉴定。
Merkel细胞癌与核纤层蛋白
通过半定量IHC，研究发现MCC原发组织中心A型核纤层蛋白低表达、B型核纤层蛋白高表达；MCPyV阳性和阴性无差异；淋巴结转移A型核纤层蛋白高但变化，配对病例显示表达灵活；皮肤Merkel细胞A/B型强表达；A型核纤层蛋白表达灵活性与MCC侵袭性和癌发生相关。
讨论与结论
讨论强调，Kashimoto等结果提示抗CC3免疫染色在ATC质膜中的异常模式可能不是凋亡，而是与侵袭性相关的诊断标志物，并需进一步鉴定非特异性蛋白；该研究再次说明验证免疫染色模式的重要性。Stiekema等结果提示MCC中原发与转移灶A型核纤层蛋白表达灵活，B型核纤层蛋白高表达，MCPyV状态无关，这些发现对理解MCC癌发生和侵袭性有意义。翻译研究结论：mCC3是ATC的强诊断生物标志物，与更侵袭性肿瘤行为相关，并可能是未知凋亡相关蛋白；MCC原发肿瘤A型核纤层蛋白低表达、B型核纤层蛋白高表达，淋巴结转移A型核纤层蛋白高且可变，MCPyV阳性与阴性无差异，A型核纤层蛋白表达灵活性对MCC癌发生和侵袭性具有重要性。
