厄瓜多尔生牛奶中嗜温细菌的多重 qPCR 检测与风险评估

《Scientific Reports》：High prevalence and diversity of mesophilic bacteria detected in pre-enrichment raw milk from Ecuador using two multiplex TaqMan qPCR assays

摘要

在厄瓜多尔，饮用生牛奶仍然很普遍且具有传统意义，这主要是因为生牛奶在非正规市场有销售。尽管人们已经认识到生牛奶可能携带多种人畜共患病原体和化学物质，但这种情况依然存在。本研究旨在验证一种多重定量PCR（qPCR）检测方法，用于同时检测和半定量评估八种对食品安全和公共健康具有影响的嗜温细菌：[单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、沙门氏菌（Salmonella）属、弯曲杆菌（Campylobacter）属、B群链球菌（Streptococcus）属、大肠杆菌（Escherichia coli，简称E. coli）、志贺氏菌（Shigella）属以及大肠杆菌O157:H7菌株。然后利用该方法来分析这些细菌在厄瓜多尔不同生产环境中生牛奶中的流行情况和分布特征。共分析了450份牛奶样本，其中包括400份来自未患临床乳腺炎的奶牛的生牛奶样本、40份来自患有乳腺炎的奶牛的样本，以及10份经过超高温处理（UHT）的牛奶样本作为阴性对照。多重PCR检测方法的扩增效率介于95%至105%之间，相关系数≥0.99，检测限和定量限均为1个基因组拷贝/μL，表现出较高的分析特异性和重复性。在几乎所有样本中都检测到了至少一种目标细菌，其中金黄色葡萄球菌（90.5%）、大肠杆菌（81.8%）和大肠杆菌O157:H7（70.8%）的检出率最高，其次是弯曲杆菌（46.3%）、单核细胞增生李斯特菌（34.0%）、沙门氏菌（28.8%）、志贺氏菌（5.8%）和B群链球菌（1.8%）。患乳腺炎的奶牛样品中所有样本均检测出大肠杆菌，金黄色葡萄球菌和B群链球菌的检出率较高，而未检测到沙门氏菌和单核细胞增生李斯特菌；所有经过UHT处理的牛奶样本均为阴性。定量分析显示多种病原体的菌载量较高。分层评估结果显示，不同省份和生产规模之间的污染模式存在显著差异，但未观察到明显的季节性（气候）影响。总体而言，研究结果证实饮用生牛奶存在重大的微生物风险，支持将多重qPCR方法作为乳制品生产中监测和基于风险控制的有效工具。饮用生牛奶对公众健康构成威胁，鉴于该地区的监管不力，建议公众仅饮用经过巴氏杀菌处理的牛奶。