开发双重线粒体qPCR检测以同时检测并区分缅因州蜱虫中的微小巴贝斯虫与鹿巴贝斯虫

《Parasites & Vectors》：A novel mitochondrial quantitative PCR duplex for the detection of Babesia microti and Babesia odocoilei

　　

摘要

背景

通常使用靶向 18S rRNA 基因的 qPCR 检测来筛查蜱虫样本和宿主血液中的 Babesia microti（微小巴贝斯虫），该病原体是美国东北部人类巴贝斯虫病的致病源。在使用多种基于 18S 的检测方法筛查蜱虫中的 B. microti 时，我们观察到结果不一致，这表明可能存在与非目标生物体的交叉反应、灵敏度有限，或两者兼有。这些观察结果突显了需要一种更灵敏且具有物种特异性的 B. microti qPCR 检测，以及需要改进的工具来检测和区分在缅因州蜱虫和脊椎动物宿主中循环的其他 Babesia（巴贝斯虫）物种。

方法

我们确定 Babesia odocoilei（鹿巴贝斯虫）是在缅因州 Ixodes scapularis（黑腿蜱）中最常发现的其他 Babesia 属物种，并对 B. microti 和 B. odocoilei 线粒体 DNA 的约 5000 bp 区域进行了测序。随后，我们开发并评估了一种双重线粒体 qPCR 检测，用于同时检测和区分这两种物种。

结果

使用该新检测方法，我们检测了从缅因州主动和被动监测中收集的 4,464 只 Ixodes（革蜱属）蜱虫。我们在 449 只蜱虫（10.1%）中检测到 B. microti，在 803 只蜱虫（18.0%）中检测到 B. odocoilei，在 92 只蜱虫（2.1%）中检测到混合感染。患病率因收集方法、蜱虫生命阶段和地点而异。在 46 只 B. microti 阳性蜱虫中，线粒体检测产生的 Cq 值比两种已发表的 18S rDNA 检测方法低 5.9–7.1 个循环（Dunnett 校正 p < 0.0001）。

结论

与已发表的 18S rDNA 检测方法相比，线粒体双重 qPCR 检测提高了对 B. microti 和 B. odocoilei 的灵敏度和检测能力。这些结果支持使用线粒体靶标来提高共存 Babesia 物种的区分度，并加强蜱传病原体监测数据的解读。

图形摘要