转移因子对雏鸡禽呼肠孤病毒(ARV)感染的抑制作用：预防性与治疗性给药效果评价

《Poultry Science》：Inhibitory Effects of Transfer Factor Against Avian Reovirus Infection in Chicks

　　

禽呼肠孤病毒（avian reovirus，ARV）感染可引起鸡病毒性关节炎、生长迟缓和免疫抑制。当前免疫预防主要依赖疫苗接种，但其保护效力有限。本研究评估了转移因子（transfer factor，TF）抗ARV感染的效力。将1日龄无特定病原体（specific-pathogen-free，SPF）雏鸡随机分为4组（每组n = 35）：预防组（3至5日龄给予TF）、治疗组（9至11日龄给予TF）、感染组和空白对照组。除空白对照组外，所有雏鸡均于7日龄感染ARV。感染后每隔7天测量体重和免疫器官指数（器官重量/体重），观察足垫和跗关节病理变化，并通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）检测肌腱和泄殖腔拭子中的ARV载量。结果显示，感染组在整个研究期间体重持续最低，并伴有肝脏、脾脏和胸腺显著增大、法氏囊萎缩以及足垫和跗关节肿胀和出血。相反，两个TF处理组均表现出体重损失显著减轻，免疫器官损伤明显降低。此外，两个TF组肌腱中的ARV载量均低于感染组。感染后14天，感染组泄殖腔拭子中的病毒排毒显著高于两个TF处理组。这些发现表明，TF无论预防性还是治疗性给药，均可有效抑制靶器官中的ARV复制并减轻相关病理损伤，提示TF可作为ARV感染临床控制和预防的可行辅助策略。

禽呼肠孤病毒（avian reovirus，ARV）是一种无囊膜双链RNA病毒，属于呼肠孤病毒科（Reoviridae）正呼肠孤病毒属（Orthoreovirus），可感染鸡、鸭、鹅等家禽，幼禽尤其易感。ARV感染与病毒性关节炎、腱鞘炎、生长迟缓和免疫抑制相关，并可通过垂直和水平途径高效传播。近年来，中国多个地区有散发或地方流行趋势。当前疫苗对异源毒株的交叉保护有限，免疫抑制条件下继发感染风险增加，给养禽业造成较大经济负担，因此亟需开发替代性辅助防控策略。转移因子（transfer factor，TF）是由T淋巴细胞释放的小分子物质，可携带致敏淋巴细胞的特异性免疫信息并转移给受体，从而非特异性增强宿主免疫功能。在家禽中，TF已用于预防和治疗鸡传染性贫血、传染性法氏囊病和禽网状内皮组织增殖病等病毒性和免疫抑制性疾病，显示出免疫调节和抗病毒作用。本研究利用ARV感染模型，系统评价TF在预防性和治疗性给药方案下对ARV感染雏鸡体重增长、器官损伤缓解和病毒抑制的作用，旨在为TF用于ARV感染临床防控提供实验依据。

研究人员开展的研究为：采用1日龄SPF雏鸡建立ARV感染模型，评价TF的预防性和治疗性效果。关键方法概括如下（不超过250字）：使用140只1日龄SPF雏鸡，购自Jinan Spafas Poultry Co., Ltd.（Jinan, China），随机分为4组，每组35只，包括预防组、治疗组、感染组和空白对照组。ARV-SD-2025株经RT-PCR及σC基因测序确认，并用LMH细胞增殖和TCID₅₀滴定。预防组于3至5日龄每日口服TF 0.5 mL/只，治疗组于9至11日龄每日口服TF 0.5 mL/只；除空白对照组外，各组于7日龄经足垫接种0.1 mL含10⁴ TCID₅₀的ARV悬液，空白对照组接种无菌生理盐水。感染后7、14和21天记录体重；每组随机取6只剖检，称量肝脏、脾脏、法氏囊和胸腺并计算免疫器官指数，观察足垫和跗关节病变；取肌腱，并在每组另取10只采集泄殖腔拭子，提取病毒RNA，采用TaqMan qPCR检测ARV M1基因载量。统计分析使用GraphPad Prism 5，采用非配对t检验、单因素或双因素方差分析及非参数检验，数据以means ± SD表示，P < 0.05为显著。

研究结果如下：

1. TF对ARV感染SPF鸡体重的影响（Effect of TF on the Body Weight of SPF Chickens Infected with ARV）：通过感染后7、14和21天体重测定发现，感染组体重在7天时显著低于空白对照组（P < 0.01），并持续最低；14天时预防组体重显著高于感染组（P < 0.05）；21天时预防组与空白对照组差异不显著（P > 0.05），且显著高于感染组（P < 0.05）。结果表明，TF给药可有效缓解ARV引起的生长抑制。

2. TF对ARV感染SPF鸡肝脏的影响（Effects of TF on the Livers of SPF Chickens Infected with ARV）：通过肝脏指数测定发现，14天时所有ARV接种组的肝脏指数均高于空白对照组，感染组显著高于空白对照组（P < 0.0001），预防组和治疗组显著低于感染组（分别为P < 0.01和P < 0.05）；21天时各组肝脏指数下降，感染组仍略高但差异无统计学意义（P > 0.05）。结果表明，TF可减轻ARV诱导的肝脏肿大。

3. TF对ARV感染SPF鸡脾脏的影响（Effects of TF on the Spleens of SPF Chickens Infected with ARV）：通过脾脏指数测定发现，7天时感染组脾脏显著肿大，其脾脏指数显著高于预防组（P < 0.0001）和治疗组（P < 0.01）；14天和21天时感染组脾脏指数仍显著高于空白对照组（P < 0.05），两个TF处理组低于感染组但差异无统计学意义（P > 0.05）。结果表明，ARV感染引起脾脏肿大，TF给药有助于缓解该肿大。

4. TF对ARV感染SPF鸡胸腺的影响（Effects of TF on the Thymus of SPF Chickens Infected with ARV）：通过胸腺指数测定发现，14天时感染组胸腺指数显著高于空白对照组、预防组和治疗组（分别为P < 0.0001、P < 0.0001和P < 0.001）；21天时感染组仍显著高于空白对照组（P < 0.01）和预防组（P < 0.05），而治疗组与感染组差异不显著（P > 0.05）。结果表明，ARV感染诱导雏鸡胸腺明显增大，TF给药可有效减轻该增大，且预防性方案优于治疗性方案。

5. TF对ARV感染SPF鸡法氏囊的影响（Effects of TF on the Bursa of Fabricius in SPF Chickens Infected with ARV）：通过法氏囊指数测定发现，14天时所有ARV接种组均出现法氏囊萎缩，感染组法氏囊指数显著低于空白对照组（P < 0.01）；两个TF处理组数值上高于感染组但差异无统计学意义（P > 0.05）；21天时四组法氏囊指数差异不显著（P > 0.05），但两个TF处理组较感染组呈恢复趋势。结果表明，TF给药可部分减轻ARV诱导的法氏囊萎缩。

6. TF对ARV感染SPF鸡肌腱病毒载量的影响（Effect of TF on the Viral Load in the Tendons of ARV-Infected SPF Chickens）：通过TaqMan qPCR检测肌腱中ARV载量发现，感染组在整个研究期间病毒载量均高于预防组和治疗组，所有ARV接种组病毒载量随时间逐渐下降；14天时感染组病毒载量显著高于预防组（P < 0.01）和治疗组（P < 0.05），两个TF处理组此时已降至较低水平。结果表明，TF给药可有效抑制肌腱组织中的ARV复制，预防性方案优于治疗性方案。

7. TF对ARV感染SPF鸡泄殖腔排毒的影响（Effect of TF on Viral Shedding from the Cloaca of SPF Chickens Infected with ARV）：通过泄殖腔拭子qPCR检测发现，14天时感染组泄殖腔病毒载量显著高于预防组（P < 0.05）；治疗组也低于感染组，但差异无统计学意义（P > 0.05）。结果表明，预防性TF给药可有效减少ARV排毒，效果略优于治疗性给药，并与靶器官病毒载量趋势一致。

8. TF对ARV感染SPF鸡足垫和关节病变的影响（Effects of TF on Footpad and Joint Lesions in SPF Chickens Infected with ARV）：通过大体病理观察发现，14天时感染组病变最严重，表现为足垫明显肿胀增厚、局部暗红色炎性充血、皮嵴消失、皮下水肿致皮肤表面发亮，跗关节明显增大、纤维组织增生、轮廓不清；预防组病变基本消退，仅见轻微病理痕迹；治疗组病变较感染组明显减轻，表现为中度足垫肿胀、皮嵴粗糙扁平但无明充血或溃疡，跗关节局部增大；空白对照组大体正常。关节腔剖检显示，感染组有明显出血灶和炎性渗出，预防组和治疗组大体正常。结果表明，TF可明显改善ARV引起的足垫和跗关节炎症病变。

9. TF对ARV诱导内脏器官病变的影响（Effect of TF on ARV-Induced Visceral Organ Lesions）：通过大体病理观察发现，感染组出现明显肝肿大、边缘钝、暗紫红色、局灶色泽不均；脾脏明显增大、暗红色、质地坚实；胸腺严重肿胀和充血。预防组和治疗组肝脏较小且充血较轻，脾脏明显较小、充血减轻并基本恢复正常大小、形状和颜色，胸腺肿胀和充血也明显减轻。结果表明，TF可减轻ARV诱导的肝脏、脾脏和胸腺大体病变。

讨论部分总结：ARV是引起雏鸡病毒性关节炎、腱鞘炎和生长迟缓的重要病原，常导致严重免疫抑制和显著经济损失。当前疫苗对流行变异株交叉保护有限，且尚无特异性治疗药物，因此需要安全有效的辅助防控策略。TF作为T淋巴细胞分泌的小分子免疫调节剂，可增强特异性和非特异性免疫应答，并对鸡传染性贫血和传染性法氏囊病显示较强抗病毒活性。本研究中，TF有效减轻ARV诱导的生长抑制和免疫器官损伤，降低肌腱和泄殖腔拭子中的病毒载量，并明显改善足垫和跗关节病变。讨论指出，生长迟缓是ARV感染的标志性临床表现；免疫器官损伤是ARV致病的关键特征；靶器官病毒载量是评价TF抗病毒效果的重要指标；泄殖腔排毒是ARV水平传播的主要途径。TF可能通过传递特异性免疫信号激活受体T细胞，促进细胞因子如IFN-γ产生并增强细胞免疫，从而非特异性抑制病毒复制。既往研究也证实TF可在SPF鸡体内上调多种细胞因子表达。预防组在体重恢复、肌腱病毒载量和排毒抑制方面优于治疗组，提示感染前免疫调节可能使机体在病毒攻击时更快产生保护性反应；但21天时治疗组体重和肌腱病毒载量已接近预防组，说明感染后给药也具有明显治疗益处。研究局限包括：每个时间点仅取6只鸡用于器官指数和病毒载量，未进行正式统计功效计算；未开展直接免疫学证据检测，如细胞因子定量、淋巴细胞增殖或流式细胞术。未来研究应评估剂量反应关系和替代给药方案，延长监测时间，并探索TF与疫苗联合应用的协同效应。

研究结论（原文结论翻译）：总之，利用ARV感染模型，本研究系统证明，TF无论预防性还是治疗性给药，均显著减轻生长迟缓、减轻器官损伤、降低肌腱病毒载量、减少泄殖腔病毒排毒，并明显改善足垫和跗关节炎症病变。鉴于当前ARV疫苗保护效力有限且缺乏特异性治疗药物，TF是一种安全、便捷、有效的辅助防控策略，尤其适合在早期饲养阶段进行预防性给药。未来有必要探索TF与疫苗联合应用的协同效应。