基于聚合酶螺旋反应与HNB染料的乙型肝炎病毒即时可视化检测方法

《Applied Microbiology and Biotechnology》：Colorimetric polymerase spiral reaction (PSR) assay for the rapid detection of hepatitis B virus

　　

摘要

乙型肝炎病毒（HBV）感染仍然是全球重大的健康问题，特别是在缺乏先进诊断工具的欠发达地区尤为突出。传统的分子诊断方法，如实时荧光定量PCR（qPCR），因其成本高昂且需要专业操作人员，通常仅限于城市中的集中化实验室使用。这限制了其在医疗系统基层的应用，凸显了开发低成本即时检测（PoC）方法的需求。本研究开发了一种基于聚合酶螺旋反应（PSR）结合羟萘酚蓝（HNB）染料的HBV可视化检测方法。研究设计了一组靶向HBV S基因特定区域的引物，并在等温条件下进行反应。经优化，最佳反应温度和时间分别为63 °C和60分钟。该HBV-PSR检测法的检出限为5.04拷贝，在临床评估中（n?=?85）达到100%的灵敏度和100%的特异性，并在60分钟内通过肉眼进行比色可视化检测。特异性测试表明，该检测法与其他肝炎病毒及检测的非HBV病原体无交叉反应。使用45份经血清学测试初步筛选的HBV阳性临床样本进行检测，结果显示良好的一致性率和诊断可靠性。本研究设计的HBV-PSR检测法有望作为HBV检测的即时诊断工具，用于早期监测和检测，尤其适用于资源匮乏地区的医疗需求。等温扩增与染料可视化检测的结合消除对复杂仪器的需求，实现了即时检测。

要点

• 开发了一种快速且灵敏的PSR检测法用于HBV检测，1小时内即可获得结果。

• HNB染料实现了肉眼可视化检测，无需复杂设备。

• 该检测法可检测低至5.04个DNA拷贝，表现出高诊断性能，在评估的临床样本中优于传统PCR。

图文摘要