《Journal of Hematology & Oncology》：AXL-directed antibody–drug conjugate therapy in soft-tissue sarcoma
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AXL是一种膜可及的受体酪氨酸激酶，亦是潜在的抗体药物偶联物（antibody–drug conjugate，ADC）靶点，但其在软组织肉瘤（soft-tissue sarcoma，STS）中的治疗相关性尚未完全明确。研究人员利用肉瘤组织芯片（tissue m
AXL是一种膜可及的受体酪氨酸激酶，亦是潜在的抗体药物偶联物（antibody–drug conjugate，ADC）靶点，但其在软组织肉瘤（soft-tissue sarcoma，STS）中的治疗相关性尚未完全明确。研究人员利用肉瘤组织芯片（tissue microarray）、患者来源细胞系及患者来源异种移植模型，评估了靶向AXL的吡咯并苯并二氮卓（pyrrolobenzodiazepine，PBD）ADC药物ADCT-601/mipasetamab uzoptirine。AXL表达广泛但具有异质性，其中黏液纤维肉瘤和未分化多形性肉瘤的组织学亚型水平表达最高。在与患者临床信息关联的组织芯片队列中，经临床病理因素校正后，AXL H评分与无转移生存期或总生存期均无显著关联。ADCT-601的效力显著高于携带相同SG3199载荷的非靶向抗gp120对照ADC。游离载荷敏感性在不同细胞系间存在差异，表明内在载荷易感性对活性有所贡献，而载荷匹配的对照比较则支持AXL介导的递送具有额外效应。ADCT-601可诱导细胞周期扰动、细胞凋亡及γ-H2AX积累。联合实验发现，与DNA损伤应答抑制（尤其是ATR抑制）联用可增强活性，体内研究亦支持其在两个肉瘤异种移植模型中的抗肿瘤活性。这些数据支持在生物标志物富集策略下开发下一代AXL靶向ADC方案，同时强调抗原异质性及治疗指数优化的必要性。
一、研究背景与问题
软组织肉瘤（soft-tissue sarcomas，STS）是一组异质性显著的间叶来源恶性肿瘤，在蒽环类为基础的一线治疗失败后，治疗选择极为有限，预后普遍较差。AXL作为TAM家族受体酪氨酸激酶，已被证实参与肿瘤侵袭、细胞状态可塑性和治疗耐药等关键恶性生物学过程。由于AXL是膜可及的表面抗原，即使其并非肿瘤的主要驱动基因，仍可介导抗体药物偶联物（antibody–drug conjugate，ADC）的结合、内化及载荷递送，因此被认为是颇具吸引力的ADC靶点。既往AXL靶向ADC的临床经验亦提示，抗原表达更可能作为富集生物标志物而非二元预测指标发挥作用。然而，AXL在软组织肉瘤中的治疗相关性尚未被充分阐明，尤其是其表达谱系、预后关联、药物敏感性机制以及与DNA损伤应答抑制剂的联合策略均缺乏系统性评估。基于此，研究人员开展了针对AXL靶向PBD-ADC药物ADCT-601/mipasetamab uzoptirine的转化研究，旨在明确其抗肿瘤活性、作用机制及潜在的联合治疗策略。
二、研究内容与主要结论
该研究发表于《Journal of Hematology》。研究人员利用包含616个可评估核心的肉瘤组织芯片，系统评估了AXL在多种软组织肉瘤组织学亚型中的表达情况；同时采用11株AXL阳性肉瘤细胞系及患者来源异种移植（patient-derived xenograft，PDX）模型，全面评价了ADCT-601的体外和体内抗肿瘤活性，并探索了与DNA损伤应答抑制剂的联合效应。
三、主要技术方法
研究人员采用了以下关键技术方法：基于肉瘤组织芯片的免疫组化染色与H评分定量分析，用于评估AXL在不同组织学亚型中的表达分布及其与临床预后的关联；患者来源细胞系的体外药敏实验，比较ADCT-601与非靶向对照ADC及游离载荷的半数抑制浓度（IC50）；细胞周期、凋亡及DNA损伤标志物检测，用于阐明药物作用机制；体外药物联合实验，采用ZIP、HSA、Bliss和Loewe等多种模型评价协同效应；以及患者来源异种移植模型的体内疗效与生存分析，验证ADCT-601单药及联合ATR抑制剂的抗肿瘤活性。
四、研究结果
AXL在软组织肉瘤中表达广泛但具有异质性：基于616个可评估的组织芯片核心，AXL表达广泛但异质性显著。黏液纤维肉瘤和未分化多形性肉瘤（undifferentiated pleomorphic sarcoma，UPS）的平均H评分最高，分别为60.3和43.6，而滑膜肉瘤和成人纤维肉瘤表达较低。在379例局限性病变且具有有效无转移随访数据的患者中（133个事件），单因素分析显示AXL H评分与无转移生存期无显著关联（每10分风险比[hazard ratio，HR]为0.99；95%置信区间[confidence interval，CI]为0.96–1.02；P=0.61），经年龄、性别、肿瘤大小、深度、分级及组织学类型校正后仍无关联（HR为1.00；95%CI为0.97–1.03；P=0.85）。在409例具有生存数据的患者中，AXL与总生存期亦无显著关联（每10分HR为1.00；95%CI为0.98–1.02；P=0.86），UPS或黏液纤维肉瘤亚组分析亦未发现显著信号。该结果表明组织学类型可能富集AXL表达，但AXL丰度并非预后替代指标。
ADCT-601在体外具有显著且靶向依赖的抗增殖活性：在11株AXL阳性肉瘤细胞系中，ADCT-601的中位IC50为0.006 nM（范围0.001–0.040），而非靶向抗gp120对照ADC B12-PL1601的中位IC50为5.849 nM（范围0.211–288.2），两者中位比值达737倍。游离载荷SG3199与ADCT-601的IC50比值在0.10至65.5之间，表明内在载荷敏感性在不同细胞系间差异显著。该结果提示载荷易感性以细胞系依赖方式贡献活性，而ADCT-601较载荷匹配的非靶向ADC显著更强的效力支持AXL介导递送的额外贡献。
ADCT-601可诱导细胞周期扰动、凋亡及DNA损伤：在AXL阳性肉瘤细胞中，ADCT-601处理导致细胞周期紊乱、凋亡增加及γ-H2AX积累，表明其通过PBD载荷诱导DNA损伤进而发挥细胞毒性作用。
ADCT-601与ATR抑制剂联合具有协同效应：在IB115细胞中，ADCT-601与ATR抑制剂ceralasertib（AZD6738）联用，在ZIP、HSA、Bliss和Loewe四种模型中均呈现阳性协同；ATM抑制剂AZD0156的联合效应较为温和，而在AXL阴性MCF-7细胞中联合效应微弱或缺失。
体内研究证实ADCT-601的抗肿瘤活性及联合增效：在KN473和JR588两个UPS患者来源异种移植模型中，ADCT-601显著改善生存（相较于对照组的风险比分别为0.013和0.090），而B12-PL1601的活性较弱（分别为0.182和0.190），靶向优势的幅度在两个模型间存在差异，可能反映抗原密度、定位、内化效率、生长动力学及内在PBD敏感性的差异。在另一项JR588实验中，仅ADCT-601联合berzosertib显著改善生存（风险比为0.32；P=0.021）。
五、讨论与结论
该研究结果需结合enapotamab vedotin和mecbotamab vedotin的异质性临床结果以及ADCT-601因剂量优化/扩展阶段未能证实有利获益风险比而终止开发的背景进行解读。本研究确立了生物学概念验证，而非支持原样恢复ADCT-601的开发。未来开发应优先建立标准化的膜性AXL评分体系，对AXL阴性肿瘤进行单独分析，确认载荷递送的药效学证据，并优化抗体、连接子、载荷、剂量及给药方案。ATR联合策略在机制上具有吸引力，但需审慎评估治疗指数。总体而言，在纳入生物标志物选择和现代ADC工程化设计的前提下，AXL在特定成人多形性软组织肉瘤亚型中仍是可信的ADC靶点。
