《BioMed Research International》：Safety Evaluation of Essential Oil Formulation (EOF) in Albino Wistar Rats: An Experimental Study
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背景：伊拉克许多人将橄榄油、迷迭香油和薰衣草油用于化妆品。然而，关于这些植物精油的安全性，缺乏显著证据支持。目的：本研究旨在通过多种参数，检验精油复方制剂（EOF）对白化Wistar大鼠的急性和亚慢性毒性。材料与方法：收集的精油通过气相色谱-质谱联用（GC-M
背景：伊拉克许多人将橄榄油、迷迭香油和薰衣草油用于化妆品。然而，关于这些植物精油的安全性，缺乏显著证据支持。目的：本研究旨在通过多种参数，检验精油复方制剂（EOF）对白化Wistar大鼠的急性和亚慢性毒性。材料与方法：收集的精油通过气相色谱-质谱联用（GC-MS）进行分析。对于急性毒性试验，18只大鼠被均分为3组，每组6只，分别为低剂量组、中剂量组和高剂量组，单次口服给药（分别为500、1000和2000 mg/kg）。而对于亚慢性毒性试验，共30只大鼠被分配到五个组，每组六只实验大鼠随机分配至第I组（对照组），给予自来水，而第II-V组分别接受由橄榄油、迷迭香油和薰衣草油制备的50、150、250和350 mg/kg的EOF。根据经济合作与发展组织（OECD）408指南（口服毒性-固定剂量法），对大鼠进行了为期90天的重复剂量口服毒性研究。在使用戊巴比妥钠进行人道安乐死后，采集血液样本用于肝肾功能测试、血液学参数和电解质平衡指标检测。同时，取出肝脏和肾脏进行组织病理学分析。结果：橄榄油主要由油酸组成，含有微量的亚油酸和棕榈酸。迷迭香油的主要成分包括α-蒎烯（α-pinene）、1,8-桉叶素（1,8-cineole）和樟脑（camphor），而薰衣草油则含有芳樟醇（linalool）、乙酸芳樟酯（linalyl acetate）、1,8-桉叶素、β-罗勒烯（β-ocimene）、萜品烯-4-醇（terpinen-4-ol）和樟脑。EOF的未观察到有害作用水平（NOAEL）超过2000 mg/kg体重。接受50、150、250和350 mg/kg EOF治疗的大鼠在治疗3个月后未表现出毒性或死亡。与对照组相比，EOF治疗组的肝肾功能测试、电解质平衡和血液标志物指标未受到显著影响。不同剂量EOF治疗后，肝脏和肾脏的组织病理学显示无明显变化。结论：在所评估的参数（包括免疫、血液、酶和重要器官系统）中未观察到显著毒性。因此，由于其NOAEL超过2000 mg/kg体重，EOF被认为相对安全且无毒性，可供使用。
一、研究背景与意义
在全球范围内，约80%的人口依赖草药治疗，这一趋势在伊拉克尤为明显，草药疗法深深植根于当地文化。橄榄油、迷迭香油和薰衣草油在伊拉克常被用于化妆品领域。尽管这些芳香植物的精油已被民族药理学证实具有多种有益于人类疾病的功效，但其安全性尚未得到充分阐明。精油（EOs）的化学成分复杂，包含酯类、醛类、醇类、酮类和萜烯等。某些精油即使在小剂量下也可能对人体造成严重危害，如引起黏膜疼痛、呕吐、上腹痛、腹泻、癫痫、肾衰竭、肝毒性、头晕及中枢神经系统抑制。例如，百里香精油中的萜品醇被认为具有微粒体诱变性，而其中的芳樟醇可杀死皮肤细胞。因此，对人类使用的精油进行毒性研究至关重要。肝毒性和肾毒性是导致临床试验中止的主要原因。目前，在伊拉克尚无关于由橄榄、迷迭香和薰衣草精油组成的复方制剂（EOF）的未观察到有害作用水平（NOAEL）的详细公开数据。NOAEL是指在暴露动物中未引起形态、生长、发育或寿命方面可检测到不良变化的最高测试剂量，是确定化学药品和药物风险安全暴露水平的关键起点。因此，本研究旨在通过血液学、生物化学和组织病理学方法，体内检验这些精油的急性和亚慢性毒性，并确定由这些提取油制备的精油复方制剂（EOF）的NOAEL。
二、主要关键技术方法
研究人员从伊拉克库尔德斯坦地区埃尔比勒的Tishk国际大学植物园采集新鲜橄榄、迷迭香和薰衣草叶片，经植物学家鉴定后，采用水蒸馏法并使用Clevenger装置分别提取各叶片精油馏分，脱水后储存。随后将三种油馏分按1:1:1（v/v/v）等体积混合制备成EOF。在混合前，使用气相色谱-质谱联用（GC-MS）对各单一油馏分进行化学成分表征。研究选用48只雄性白化Wistar大鼠（8-9周龄，体重150-175克），购自伊拉克基尔库克Al-Kitab大学药学院动物房。急性毒性研究中，18只大鼠分为三组（每组6只），分别单次口服500、1000和2000 mg/kg的EOF。亚慢性毒性研究中，30只大鼠分为五组（每组6只），对照组给予自来水，其余四组分别每日口服50、150、250和350 mg/kg的EOF，持续90天。实验结束时，对动物实施安乐死，采集血液进行血液学、生化（肝功能、肾功能、电解质）检测，并对肝脏和肾脏进行组织病理学检查及半定量评分。
三、研究结果
3.1 精油的植物化学分析
GC-MS分析揭示了三种精油不同的化学特征。橄榄叶衍生油馏分主要由脂肪酸相关成分组成，包括油酸（6.07%）、十五烷酸（5.53%）、十六烷酸（3.86%）和亚油酸（3.13%），鉴定成分占总色谱组成的22.73%。迷迭香叶精油以单萜类化合物为主，主要成分包括马鞭草烯酮（23.46%）、1,8-桉叶素（15.96%）、α-蒎烯（12.10%）和樟脑（10.98%），鉴定成分占91.25%。薰衣草叶精油的特征是薰衣草醇异丁酸酯（52.61%）含量最高，其次是芳樟醇（5.41%）、1,8-桉叶素（2.14%）、樟脑（1.91%）、β-罗勒烯（1.86%）和乙酸芳樟酯（1.86%），鉴定成分占71.25%。
3.2 急性毒性效应
单次口服2000 mg/kg剂量的EOF后24小时，所有动物均未出现不良反应或死亡，表明EOF的NOAEL大于2000 mg/kg。动物的生长率、食物和水摄入量与正常动物相当。
3.3 亚慢性毒性效应
3.3.1 临床、神经行为观察与死亡率
连续90天口服不同浓度EOF后，实验动物的皮肤、毛发、眼睛或粘膜未见任何改变，各组均无死亡，也未观察到神经行为异常。
3.3.2 体重分析
从第0天到第90天，所有组别大鼠的体重均逐渐增加。与第1天相比，第90天各组体重均有显著增长。
3.3.3 血液学分析
与预处理期相比，150、250和350 mg/kg EOF给药组的白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白量（MCH）和平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）显著降低。然而，与正常动物相比，这些变化并未指示任何异常的血液学状态。
3.4 生化参数
肝功能测试显示，350 mg/kg EOF处理组的AST和ALT水平显著升高，但仍处于正常范围。肾功能测试方面，250和350 mg/kg EOF处理组的血糖和总蛋白水平显著高于正常组，但数值仍在正常范围内。电解质测定结果显示，仅150和250 mg/kg EOF处理组的钠离子水平显著低于正常组，但数值仍在正常范围内。
3.5 肝脏与肾脏组织学
经过3个月的350 mg/kg EOF治疗后，大鼠肝脏显示出轻度弥漫性肝细胞变性、空泡样变伴颗粒状胞浆和核固缩。根据半定量评分，这些改变被归类为轻度（1级）。在较低剂量（50、150和250 mg/kg）下，肝细胞特征与对照组相似。所有处理组的肾脏组织均保留了正常的肾脏结构，包括清晰的皮质和髓质、明确的肾小体（肾小球）以及有序的管状结构，评分为0（无）。
四、讨论与结论总结
讨论部分总结： 研究表明，单次口服最高剂量（2000 mg/kg）EOF后，所有动物存活且无临床神经行为异常，表明其NOAEL > 2000 mg/kg体重，符合全球化学品统一分类和标签制度（GHS）中第V类（在限值剂量水平下安全）的分类。与其他研究相比，本研究的NOAEL值高于枯茗籽精油（500 mg/kg/day）和牛至精油（200 mg/kg）的报道值，差异可能源于处理周期、动物性别、植物种类和样品浓度的不同。连续90天口服不同浓度EOF后，未观察到体重、生长、临床症状、大体病理学及生化指标和组织病理学的显著不良改变，证实了EOF长期口服的安全性。虽然高剂量组的部分血液学和生化指标出现统计学显著变化，但这些变化均在正常范围内，不具有临床相关性。这是伊拉克首次使用三种精油组合的EOF进行急性和亚慢性毒性评估的研究。
研究结论翻译： 对白化Wistar大鼠单次过夜口服最大剂量2000 mg/kg的EOF未产生任何不良效应。因此，不同剂量的EOF在长达90天的连续口服给药后，未导致实验动物出现显著的血液学、生化或组织病理学改变。因此，推荐对该配方进行更深入的测试以更好地表征其特征，之后它或许可以安全地与靶向疗法一起用于治疗许多人类疾病。
