《Veterinary Medicine and Science》：Molecular Prevalence and Antimicrobial Resistance Patterns of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus in Buffaloes from Bangladesh
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背景：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA）是家畜中一种新出现的人兽共患病原体，并对公共卫生构成潜在威胁。
目的：本横断面研究调查了从孟加拉国 Sylhet 和 Noak
背景：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA）是家畜中一种新出现的人兽共患病原体，并对公共卫生构成潜在威胁。
目的：本横断面研究调查了从孟加拉国 Sylhet 和 Noakhali 地区水牛鼻腔拭子中分离的金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和 MRSA 的流行率、抗菌药物耐药谱及分子特征。
方法：共采集400份鼻腔拭子，采用选择性培养和生化试验进行筛查，随后通过PCR靶向 nuc 基因检测金黄色葡萄球菌，靶向 mecA 基因检测 MRSA。按照临床和实验室标准协会（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）2020标准，采用纸片扩散法进行抗菌药物敏感性试验（antimicrobial susceptibility testing, AST）。
结果：总体而言，78株分离株（19.5%；95% CI：15.7–23.7）被确认为金黄色葡萄球菌，其中43株（10.5%；95% CI：7.7–13.9）被鉴定为 MRSA。在1–3岁水牛（14.1%）、雄性（14.8%；p = 0.01）以及有呼吸道症状的动物（25.2%）中观察到更高的 MRSA 流行率，而健康水牛为4.3%（p < 0.001）。MRSA 分离株的 AST 显示对头孢西丁（cefoxitin, FOX，97.7%）、头孢曲松（ceftriaxone, CRO，86.0%）和四环素（tetracycline, TET，65.1%）高度耐药，而对环丙沙星（ciprofloxacin, CIP，4.7%）和左氧氟沙星（levofloxacin, LEV，9.3%）的耐药率较低。在88.4%（95% CI：74.9–96.1）的 MRSA 分离株中检测到多重耐药，多重抗生素耐药指数（multiple antibiotic resistance index, MARI）值为0.23至0.54。检测到毒力基因（sea、hla 和 icaA）及耐药基因（aac(3)-IV、sul1、tetA 和 strA）。
结论：这些发现表明水牛中存在显著的 MRSA 负担，强调需要谨慎使用抗生素并进行持续监测，以降低人兽共患传播风险。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是全球公共卫生和兽医重要病原体，可定植多个解剖部位并在家畜中引起多样临床结局。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA）因多重耐药（multidrug-resistant, MDR）表型、在农场环境持续存在及跨物种传播潜力而成为威胁。在家畜中，前鼻孔和上呼吸道是 MRSA 定植的关键生态位，可通过气溶胶、直接接触和污染物传播。MRSA 在牛中尤其是奶牛乳房炎中已有广泛研究，但其在水牛中的发生和流行病学作用仍了解不足。水牛是包括孟加拉国在内的许多亚洲国家重要的乳用和役用物种，但针对其呼吸道 MRSA 携带的研究几乎缺失。呼吸道是关键储库，定植动物可为无症状携带者，向其他组织播种感染或在群内传播耐药株。金黄色葡萄球菌是奶牛乳房炎主要病原之一，鼻腔携带常先于乳房内感染，因此水牛鼻腔 MRSA 定植可能成为自家感染或群内交叉感染途径，并可能导致难治性乳房炎。在抗菌药物使用广泛且常不受监管的情况下，呼吸道 MRSA 携带也对农场工人和社区构成人兽共患风险。尽管孟加拉国家畜中已确认多重耐药细菌如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和克雷伯菌存在，但这些研究大多未包括水牛，也未表征呼吸道样本 MRSA 的分子谱或耐药模式。迄今孟加拉国尚无发表研究系统检查水牛鼻腔拭子 MRSA 的发生、分子确认和抗菌药物耐药（antimicrobial resistance, AMR）模式。为填补该空白，研究人员开展本研究，从水牛鼻腔拭子分离鉴定 MRSA，用PCR进行分子确认，并评估其对常用抗生素的 AMR 模式。研究结果旨在为水牛健康临床管理和抗菌药物管理策略提供信息，并增进孟加拉国人兽共患 AMR 风险理解。
研究人员于2023年4月至2024年9月开展横断面研究，样本队列来源于孟加拉国 Sylhet 的 Zakiganj、Gowainghat、Golapganj、Jaintapur、Fenchuganj 和 Noakhali 的 Swarna Dweep 六个 upazila（次区），共采集400份水牛鼻腔拭子，水牛个体为采样单位。关键技术方法包括：选择性培养与生化试验初筛；细菌基因组DNA提取；PCR检测 nuc 基因确认金黄色葡萄球菌、mecA 基因确认 MRSA；按 CLSI 2020 标准以 Kirby–Bauer 纸片扩散法进行 AST；PCR检测耐药基因 aac(3)-IV、tetA、strA、sul1 和毒力基因 hla、sea、icaA、fnbA；计算 MDR 与 MARI；使用 R 4.5.1 进行统计分析。
研究结果如下。3.1 MRSA 与流行病学变量的关系：400份鼻腔拭子中，78份（19.5%；95% CI：15.7–23.7）经 nuc 基因PCR确认为金黄色葡萄球菌；43份（10.5%；95% CI：7.7–13.9）经 mecA 基因检测鉴定为 MRSA。地理上，流行率从 Zakiganj 的5.36%到 Swarna Dweep 的14.55%。年龄上，1–3岁水牛最高（14.13%），<1岁为6.25%，>3岁为8.65%。雄性（14.83%）高于雌性（6.88%），差异有统计学意义（p = 0.01）。有呼吸道症状水牛（25.21%）显著高于临床健康水牛（4.27%）（p < 0.001）。3.2 MRSA 的抗菌药物敏感性模式：对43株 MRSA 的表型 AST 显示，对头孢西丁（97.7%）和头孢曲松（86.0%）耐药最突出，其次为四环素（65.12%）和氨苄西林（58.14%）。对甲氧苄啶-磺胺甲噁唑（41.86%）和庆大霉素（48.84%）呈中等耐药。较低耐药率见于阿米卡星（9.30%）、阿奇霉素（9.30%）、环丙沙星（4.65%）和左氧氟沙星（9.30%）。多数分离株对氟喹诺酮类敏感，环丙沙星敏感率81.40%，左氧氟沙星86.05%。热图显示高耐药组（头孢西丁、头孢曲松、四环素）聚为一类，敏感组（环丙沙星、左氧氟沙星、阿奇霉素等）聚为另一类。Spearman 相关分析揭示不同抗生素耐药模式之间的关联。3.3 表型耐药模式与 MAR 指数：43株 MRSA 中，38株（88.4%；95% CI：74.9–96.1）为 MDR-MRSA，即对三类或以上抗生素耐药。38株 MDR MRSA 的 MARI 范围为0.23至0.54，提示暴露于频繁使用抗生素的高风险环境。3.4 毒力基因分布：在78株金黄色葡萄球菌中，sea 基因（葡萄球菌肠毒素A）检出率最高（17.94%），其次 hla（溶血素A；11.53%）和 icaA（细胞内黏附A；6.41%）。没有分离株携带 fnbA 基因（纤连蛋白结合蛋白A）。3.5 耐药基因分布：金黄色葡萄球菌分离株中，aac(3)-IV 检出率最高（15.38%），其次 sul1（10.25%）、tetA（8.97%）和 strA（5.12%）。若干 MDR 分离株携带多个抗菌药物耐药基因（antimicrobial resistance genes, ARGs），支持观察到的表型耐药模式。
讨论部分总结：研究人员指出，本研究提供孟加拉国水牛鼻腔拭子金黄色葡萄球菌高流行、AMR 和毒力基因携带的基线数据，多数为 MRSA。在 One Health（同一健康）方法下，这对家畜生产、人和动物健康及抗生素使用有重要意义。研究补充了家畜相关 MRSA 文献，表明水牛可作为 MRSA 储库，并关注被忽视宿主物种。MRSA 通常从奶牛乳房炎和人类传播，但 MRSA 阳性样本也提示可能通过鼻腔拭子传播。集约化养殖、饲养密度增加、抗生素滥用和生物安全差可能促进 ARGs 传播。研究结果支持先前在猪和牛中 MRSA 报道，但适用于水牛鼻腔拭子这一研究较少的样本。总体 MRSA 流行率10.50%，金黄色葡萄球菌19.5%。与埃及水牛43.6%和中国牛18%等研究比较，孟加拉国情况与抗生素可获得性、滥用、兽医监督少及农业部门 ARGs 存在有关。地理变异从5.36%到14.55%，虽不高度显著，但提示抗生素使用模式、农场管理和环境条件影响。年龄上1–3岁最高，可能因环境暴露增加和早期生产年份抗菌治疗。雄性高于雌性可能涉及行为、生理或管理差异，如环境暴露、身体应激或激素对免疫影响。有呼吸道症状水牛 MRSA 流行率25.21%，显著高于健康4.27%，支持 MRSA 常与临床疾病特别是呼吸道和伤口感染相关。AST 显示广泛 MDR，mecA 介导的β-内酰胺耐药由头孢西丁高耐药证实；四环素耐药高与兽医广泛使用一致；庆大霉素耐药显著；喹诺酮类最有效，但需谨慎使用以防快速耐药。毒力基因方面，黏附和免疫逃逸基因常见，提示持续定植而非急性毒素介导疾病；毒素相关基因虽较少，但部分分离株可能引起更严重疾病。分子分析显示 tetA、aac-3(iv)、sul1 和 strA 常共现，提示克隆传播或水平基因转移。研究强调孟加拉国水牛养殖部门需要抗菌药物管理、合理用药、严格生物安全和加强 AMR 监测，并采取 One Health 方法控制耐药菌传播。
结论翻译：本研究揭示孟加拉国水牛中金黄色葡萄球菌和 MRSA 鼻腔携带相当可观，MRSA 在10.5%动物中检出。MRSA 流行率因地点而异，在雄性和有呼吸道症状水牛中显著更高，表明重要流行病学和健康相关因素。分离株对常用抗生素高度耐药，尤其β-内酰胺类、头孢菌素类和四环素，而对氟喹诺酮类和阿米卡星保留较高敏感性。高比例 MDR MRSA、升高的 MAR 指数以及毒力和耐药基因的存在强调选择性抗菌压力。这些发现突出需要常规监测、合理抗菌药物使用和改善畜群健康管理，以减轻 MRSA 潜在传播。
