《Toxicology Letters》：Snail-shRNA in AAV9 inhibited EMT and pulmonary fibrosis in silica-instilled mice
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摘要我们此前的体外研究表明，靶向转录因子Snail可能是治疗硅肺的一种策略。本研究评估了该策略在体内的可行性。我们使用CBG转基因小鼠——该小鼠模型可用于追踪和分离肺泡II型上皮细胞（AT II细胞）——以确认2.5 mg二氧化硅能在体内诱导AT II细胞发生上皮-间质转化（
摘要
我们此前的体外研究表明，靶向转录因子Snail可能是治疗硅肺的一种策略。本研究评估了该策略在体内的可行性。我们使用CBG转基因小鼠——该小鼠模型可用于追踪和分离肺泡II型上皮细胞（AT II细胞）——以确认2.5 mg二氧化硅能在体内诱导AT II细胞发生上皮-间质转化（EMT）。基于以下结果：2.5 mg二氧化硅能在小鼠肺内快速升高Snail水平，以及腺相关病毒（AAV）9载体的最佳注射剂量和稳定表达时间，我们最终确定在灌肺前1周以1.0×1011 vg/鼠的剂量注射AAV9介导的Snail敲低载体，以抑制二氧化硅引起的Snail水平升高。结果显示，AAV9中的Snail-shRNA可阻止CBG转基因小鼠中二氧化硅诱导的AT II细胞EMT，并抑制野生型小鼠中二氧化硅诱导的EMT和肺纤维化。结合定量蛋白质组学分析与dbEMT数据库映射进一步表明，Snail敲低通过以纤维连接蛋白（FN1）为中心、涉及proMMP8激活和JUN激酶信号通路的相互作用网络来抑制二氧化硅诱导的EMT和纤维化。这些发现表明，Snail在未来可作为治疗肺纤维化的靶点。
章节摘要
引言
硅肺是一种可预防的职业病，一级预防至关重要，然而近年来硅肺的流行凸显了二级预防和三级预防同样重要。除发展中国家硅肺发病率高企之外，发达国家也呈上升趋势（Cohen等，2016；The Lancet Respiratory，2019；Hoy和Chambers，2020）。因此，亟需研究硅肺的发病机制并提出可能的治疗
二氧化硅
二氧化硅购自Sigma（S5641）。粒径小于5 μm的颗粒占80%，含量约为99%。将二氧化硅配制为浓度为25 mg/ml的生理盐水悬液。经高压灭菌后，于使用当天加入浓度为5000 IU/ml的青霉素。
动物
CBG小鼠购自Jackson实验室。其转基因上带有表面活性相关蛋白C（Sftpc）增强子序列，可驱动增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的
二氧化硅在CBG转基因小鼠肺泡II型上皮细胞中诱导EMT
AT II细胞的损伤在肺纤维化疾病的发展中起重要作用（Wijsenbeek和Cottin，2020）。我们此前的研究发现，二氧化硅能在MLE-12细胞（一种小鼠AT II细胞）中诱导EMT，在
讨论
本研究首次使用CBG转基因小鼠评估二氧化硅能否在体内诱导EMT。此外，利用Snail-shRNA AAV9抑制二氧化硅诱导的EMT和肺纤维化。结果显示，该基因治疗可抑制二氧化硅诱导的EMT和肺纤维化。
此前缺乏二氧化硅能在体内诱导AT II细胞EMT的直接证据，而CBG小鼠的使用为解决这一问题提供了良好方案。CBG小鼠中的AT II细胞
资助
本研究受国家自然科学基金资助（批准号：82073498、81703197和82473603）。
作者贡献
Yuhua Wang、Enna Hu、Yan Wang、Zhonghui Zhu和Lin Tian共同构思并设计研究；Yuhua Wang完成实验；Yuhua Wang、Enna Hu和Siling Li分析数据；Jing Zhao解读实验结果；Yuhua Wang、Enna Hu、Siling Li和Jing Zhao制作图表；Yuhua Wang和Enna Hu撰写论文初稿；Yan Wang、Zhonghui Zhu和Lin Tian编辑和修改论文；Yuhua Wang、Enna Hu、Siling Li、Jing Zhao、Zhonghui Zhu、Lin Tian和Yan Wang批准了最终版本
CRediT作者贡献声明
Lin Tian：论文撰写——审阅与编辑，监督指导。Zhonghui Zhu：论文撰写——审阅与编辑，监督指导。Jing Zhao：可视化呈现，方法学设计。Siling Li：可视化呈现，方法学设计。Yan Wang：论文撰写——审阅与编辑，监督指导，项目管理，基金获取。Enna Hu：论文撰写——初稿撰写，可视化呈现，方法学设计。Yuhua Wang：论文撰写——初稿撰写，可视化呈现，方法学设计，正式分析。
利益冲突声明
作者声明不存在任何财务或其他利益冲突。
致谢
感谢首都医科大学提供的光学显微镜和激光共聚焦荧光显微镜设备。作者感谢Linyue Zou、Xiaoxue Xu和Naili Hu提供的技术支持。
Yuhua Wang|Enna Hu|Siling Li|Jing Zhao|Zhonghui Zhu|Lin Tian|Yan Wang
首都医科大学公共卫生学院职业卫生与环境健康系，北京 100069
