功能宏基因组学揭示了牛肉加工排水系统中微生物持久存活的适应机制

《Food Microbiology》:Functional Metagenomics Yields Insights into the Adaptive Mechanisms of Microbial Persistence in Beef Processing Drains

【字体: 大 中 小 】 时间:2026年10月18日 来源:Food Microbiology 5.4

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   摘要牛肉加工环境中的选择压力驱动了能够抵抗反复消毒的微生物群落的持续存在,然而其韧性背后的功能机制仍未得到充分表征。为了弥补这一知识空白,对来自美国八家牛肉加工厂 21 个排水口样本进行了宏基因组研究,评估了时空因素(加工区域及 2019 年与 2021 年的采样年份)对功能

  

摘要

牛肉加工环境中的选择压力驱动了能够抵抗反复消毒的微生物群落的持续存在,然而其韧性背后的功能机制仍未得到充分表征。为了弥补这一知识空白,对来自美国八家牛肉加工厂 21 个排水口样本进行了宏基因组研究,评估了时空因素(加工区域及 2019 年与 2021 年的采样年份)对功能潜力和耐药组组成的影响。广泛的功能概况分析发现,调控生物膜形成、群体感应、细菌分泌系统、ABC 转运蛋白、趋化运动和鞭毛组装的 KEGG 通路显著富集,其中假单胞菌属(Pseudomonas spp.)在所有富集特征中均成为主要驱动因素。差异丰度分析显示,在胴体储存冷却间和 2021 年样本中,这些通路以及多重耐药决定因子显著(Padj < 0.05)富集。这种时间变化可能反映了几个非排他性因素,包括消毒压力的变化、自然时间漂移、牛微生物组的变化或样本储存效应。使用 AMRFinderPlus 和 DeepARG 进行的抗菌耐药性分析进一步表明,占主导地位的假单胞菌属种群对设施耐药组产生了不成比例的影响,主要是通过多重药物外排系统。这一特征与 2019 年至 2021 年间β-内酰胺酶耐药性注释增加近两倍相吻合,表明环境压力可能会选择出具有临床相关性的耐药标志物。这些发现为理解人工食品加工环境中的微生物持续性提供了功能框架,并强调了评估当前消毒策略是否会无意中促进耐药、形成生物膜的群落的重要性。

引言

牛肉加工设施代表了高度专业化的人工环境,自然选择具有韧性的适应性微生物种群(Belk et al., 2022; Yang et al., 2017; Zwirzitz et al., 2021; Zwirzitz et al., 2020)。在这些环境中,包括地板排水口和设备表面在内的强大微生物生态位,通常 harbour 着能够抵御标准化学和物理干预的持久群落。此外,食品行业使用的许多传统抗菌干预措施仅针对隔离的浮游细胞进行了验证(U.S. Environmental Protection Agency, 2012, 2018)。然而,这种方法忽略了微生物生存的更广泛生态驱动力,即微生物利用外源聚合物进行物理保护或通过遗传交换增强获得的耐药性(7, 8),从而最终损害干预的长期疗效。
形成生物膜的微生物群落遍布牛肉加工环境,显著塑造了工厂更广泛的微生物景观(Yang et al., 2024)。被共生体成员分泌的胞外聚合物(EPS)包裹,生物膜结构通过提供必要的保护、营养和水平基因转移机会,促进微生物增殖,这些都是在整个牛肉加工设施恶劣环境中生存所必需的(Chitlapilly Dass and Wang, 2022; Liu et al., 2024; Luo et al., 2022; Michaelis and Grohmann, 2023)。在细菌共生体中,高细胞密度促进群体感应,这是一种信号机制,允许不同物种协调统一的反应(Li et al., 2022; Li and Tian, 2012; Wang et al., 2022)。这种集体行为通过使微生物群落在整个环境中对环境压力做出协调反应,增强了生物膜的韧性(Mukherjee and Bassler, 2019)。
除了群落水平的行为外,食品加工微生物组中的特定分类单元表现出异常的环境持久性,通过内在适应性和主动传播抗菌耐药性和持久性相关基因,不成比例地塑造了设施的耐药组(Alvarez-Molina et al., 2023)。最近的研究(Barcenilla et al., 2024; Cobo-Díaz et al., 2021; Palanisamy et al., 2023; Sequino et al., 2024; Vice et al., 2026; Wagner et al., 2020)在这些环境中识别出一组一致的关键微生物,最值得注意的是假单胞菌属(Pseudomonas spp.)、不动杆菌属(Acinetobacter spp.)、麦芽糖乳杆菌(Carnobacterium maltaromaticum)、热嗜群生菌(Brochothrix thermosphacta)和盐杆菌属(Psychrobacter spp.)。尽管这些持久居民的身份已有明确记载,但使它们能够耐受严格、频繁消毒的功能基因组机制仍知之甚少。
为了填补这些空白,本研究表征了牛肉加工设施宏基因组中促进微生物适应和持久性的功能机制。具体来说,我们分析了调控生物膜形成、群体感应、运动性和抗菌耐药性的通路的功能潜力,作为该环境中持久性的关键机制。由于肉类加工排水口是生产活动和消毒活动产生的废水和排放物的汇合处,它们是更广泛的设施微生物组的可靠代理指标(Bosilevac et al., 2024; Palanisamy et al., 2023; Rong Wang et al., 2022; Vice et al., 2026; Wang et al., 2024)。因此,在两个时间点(2019 年和 2021 年)评估了加工工厂中胴体快速冷却区域(急冷间)和胴体储存区域(冷库)的功能潜力和耐药组,以表征定居微生物群落的时空动态。

章节片段

加工厂描述

总共从八家不同的牛肉加工厂的水槽中采集了 21 个样本:工厂 A(n = 3)、工厂 B(n = 4)、工厂 C(n = 4)、工厂 D(n = 2)、工厂 F(n = 2)、工厂 G(n = 3)、工厂 I(n = 2)和工厂 J(n = 1)。样本采集自加工工厂内的两个地点之一:急冷间(n = 10)或冷库(n = 11)。急冷间(或"hotbox")是一种制冷装置,利用高速气流和低温,配合间歇性水喷淋,来

结果

以下结果利用宏基因组基因内容表征了牛肉加工排水环境中微生物群落的功能潜力。与所有鸟枪法宏基因组分析一样,宏基因组中存在某个基因并不能最终确认其在采样条件下发生转录。然而,先前在可比食品加工环境中的工作(Palanisamy et al., 2026),以及其他的宏组学研究(Hempel et al., 2022; Moitinho-Silva et al., 2014; Yu

讨论

对实验因素的分类学贝塔多样性分析表明,群落组成在采样地点或年份之间没有显著差异(P > 0.05)(Vice et al., In Review)。鉴于这种总体组成的相似性,我们在功能潜力分析中观察到的显著差异可能反映归因于物种或菌株水平差异的群落累积功能潜力的变化,而不是群落的完全更替

CRediT 作者贡献声明

Sapna Chitlapilly Dass: 写作 – 审阅与编辑,监督,方法论,资金获取,概念化。Zachariah A. Vice: 写作 – 原稿,可视化,验证,方法论,调查,数据管理。Rong Wang: 写作 – 审阅与编辑,方法论,资金获取。Joseph M. Bosilevac: 写作 – 审阅与编辑,监督,方法论,概念化

未引用参考文献

Li, 2023; Plotly Technologies Inc, 2015; Simon, 2010; U. S. Department of Agriculture - Agricultural Research Service, 2018; U.S. Environmental Protection Agency, 2012; U.S. Environmental Protection Agency, 2018; van Dijk et al.,; Vice et al.,; Wang et al., 2025; Wang et al., 2022.

数据可用性声明

作者声明支持本研究结果的数据已在文中呈现。本研究产生和分析的原始测序数据(fastq.gz)源自商业肉类加工厂,作者有义务保持机密。因此,由于与参与肉类加工设施的保密协议,这些数据不公开。数据是在与肉类加工商的非披露协议(NDA)下产生的,并且

稿件准备期间生成式人工智能协助声明

在本工作的准备过程中,作者使用了 Google Gemini 进行文本语法编辑、提高可读性、优化分析代码效率及其注释。在使用该服务后,作者根据需要审阅并编辑了内容,并对已发表文章的内容承担全部责任。

资助声明

本研究由 USDA-NIFA-AFRI 拨款 2020-67017-30776 以及 Beef Checkoff 和 Meat Foundation(USDA-REE 协议编号/FAIN: 58-3040-1-006)支持。资助方在研究设计、数据收集和分析、出版决定或稿件准备中没有任何角色。

利益冲突声明

? 作者声明,他们没有已知的竞争性经济利益或个人关系,这些利益或关系可能影响本报告中工作的出现。

致谢

我们要感谢 Greg Smith 和 Sydney Brodrick 提供的实验室技术支持,以及 Joanna VanDenBoom 提供的秘书协助。为了实事求是地报告可用数据,名字是必要的;然而,美国农业部(USDA)既不保证也不担保产品的标准,USDA 使用名称并不意味着批准该产品而排除其他可能也合适的产品。最后,USDA 是一个平等的机会提供者和雇主。
Zachariah A. Vice|Joseph M. Bosilevac|Rong Wang|Sapna Chitlapilly Dass
德克萨斯 A&M 大学动物科学系,College Station, TX, 美国
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