基于微藻可溶性组分和黏附支持成分的HaCaT角质形成细胞无血清培养配方开发及连续传代扩增研究

《Journal of Biological Engineering》：Development of a Chlorella-based serum-free culture formulation for HaCaT cells with metabolic and attachment support

　　

摘要

背景

胎牛血清（FBS）提供了多种可溶性功能和细胞外功能，这些功能在无血清培养中难以重现，尤其对于锚定依赖性细胞而言。本研究旨在通过评估微藻来源的可溶性成分、选定的培养补充剂以及一种支持黏附的成分，开发一种适用于HaCaT角质形成细胞的微藻基无血清配方。

结果

在由绿色普通小球藻以及白色和黄色原盘藻制备的低分子量组分（LF）中，绿色普通小球藻 LF产生了最高的MTT衍生的代谢活性。补充胰岛素-转铁蛋白-硒、白蛋白和抗坏血酸，即补充剂混合物（SM），进一步提高了MTT反应，但由此产生的LF?+?SM配方在传代后未能维持可观察到的细胞黏附。向SM中添加鱼明胶生成SMG，所得的LF?+?SMG配方改善了传代后的细胞保留率。在标准化重新接种条件下，直接活细胞计数表明，LF?+?SMG支持细胞通过四次连续传代扩增，到P4时累计群体倍增次数达到7.84。在LF?+?SMG条件下，后期传代期间Hoechst归一化的F-肌动蛋白相关荧光也得到了维持。

结论

最终的LF?+?SMG配方通过整合微藻来源的可溶性成分、选定的培养补充剂和黏附支持，支持了传代后细胞保留和HaCaT细胞通过四次连续传代扩增。这些发现证明了一种基于小球藻的无血清配方的可行性，该配方可为HaCaT细胞的连续培养提供代谢和黏附支持。