3F2衍生物调控单核细胞与NK细胞活化并恢复猴痘病毒刺激所致免疫介质失衡的机制研究

《Inflammation Research》：The aminoadamantane derivative 3F2 modulates monocyte and NK cell activation and restores immune mediators altered by Monkeypox virus stimuli

　　

猴痘病毒（MPV）已知采用多种免疫逃逸策略，损害抗病毒防御并破坏免疫稳态。本研究表征了灭活MPV刺激所诱导的免疫应答，并评估了氨基金刚烷胺（AMA）及其衍生物3F2恢复免疫功能的能力。经MPV刺激的外周血单核细胞（PBMC）表现出部分单核细胞亚群活化改变，以及自然杀伤（NK）细胞和自然杀伤T（NKT）细胞活化的抑制。MPV刺激还导致免疫可溶性介质水平发生显著变化，包括对抗病毒防御和免疫调节至关重要的趋化因子和细胞因子减少。3F2治疗被证明比AMA更有效，显著提高了CCL2、CXCL8、IFN-γ、IL-12(p40)、IL-15、IL-5以及VEGF和NGF-β等必需生长因子的水平。此外，3F2治疗部分逆转了单核细胞活化，并重建了NK和NKT细胞功能。当前结果表明，3F2能够在保持抗病毒应答的同时控制炎症。这些发现表明，灭活MPV刺激深刻调节固有免疫活化，并确定3F2为一种有前景的免疫调节候选药物，能够部分恢复病毒颗粒刺激所改变的免疫应答。

论文解读

一、研究背景与目的

自2022年以来，猴痘（mpox）疫情在全球迅速蔓延。截至2025年12月，全球142个国家报告了超过175,415例病例和467例死亡，其中包括至少103个此前无猴痘疫情史的国家。猴痘由正痘病毒属的猴痘病毒（Monkeypox virus，MPV）引起。痘病毒采用多种策略逃逸宿主免疫应答，包括产生干扰宿主信号通路的病毒蛋白、分泌模拟宿主细胞因子或细胞因子受体的病毒蛋白作为诱饵分子，以及抑制NK细胞和细胞毒性T细胞活性等。单核细胞和粒细胞是MPV感染的早期靶细胞，参与病毒传播和中和抗体的逃逸；NK细胞则通过细胞毒活性和细胞因子产生在抗病毒防御中发挥核心作用。

目前，美国食品药品监督管理局（FDA）于2019年批准的JYNNEOS疫苗并不能提供完全保护。在治疗方面，尚无特异性抗病毒疗法获得完全批准，临床管理主要依赖对症治疗。尽管原本用于天花治疗的tecovirimat、cidofovir和brincidofovir曾被考虑用于猴痘治疗，但近期II期临床试验显示tecovirimat对MPV Clade I感染个体缺乏疗效。在此背景下，具有免疫调节特性的抗病毒药物成为一种有前景的治疗策略——通过选择性调控宿主免疫信号通路和关键免疫细胞群，恢复抗病毒免疫、调节炎症并改善临床结局。

金刚烷胺，即氨基金刚烷胺（aminoadamantane，AMA），是首个获批用于治疗甲型流感的抗病毒药物，除抗病毒活性外还具有免疫调节特性，尤其在调节炎症反应方面。然而其在病毒感染中的相关性仍知之甚少。既往研究已证明AMA衍生物3F2对MPV感染具有强效抗病毒活性。本研究旨在探索AMA和3F2在MPV刺激下的体外免疫调节特性，重点关注其恢复病毒攻击所破坏的免疫应答平衡的能力。

二、主要关键技术方法

研究人员从健康供体外周血中分离外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMC），使用Ficoll-Paque密度梯度离心法。MPV（BR0001/2022-GenBank：ON751962.1）在生物安全三级（BSL-3）实验室中于BSC-40细胞上扩增和滴定，经0.5%多聚甲醛处理和紫外照射1小时灭活。PBMC以5×10?细胞/孔培养于96孔板中，以0.01病毒颗粒当量（VPE）每细胞的灭活MPV刺激，并同时给予AMA或3F2（100 μM）处理，孵育12小时。免疫表型分析采用流式细胞术（LRS Fortessa流式细胞仪，FlowJo V10.8.1软件分析），使用多色荧光标记单克隆抗体panel。可溶性免疫介质采用Luminex Bio-Plex Pro?人类细胞因子平台定量检测48种分析物，涵盖趋化因子、促炎细胞因子、调节性细胞因子和生长因子。数据来自6名独立健康供体（n=6），统计分析采用Wilcoxon非参数检验。

三、研究结果

3F2衍生物通过降低巡逻单核细胞表面HLA-DR表达调节MPV诱导的单核细胞亚群活化

MPV刺激降低了经典单核细胞（CD16?CD14?）水平，并有诱导促炎单核细胞（CD16?CD14?）增加的趋势。MPV刺激降低了经典和促炎单核细胞中HLA-DR的表达水平（分别为百分比和gMFI），而在巡逻单核细胞（CD16?CD14^low）中观察到病毒诱导的活化。3F2处理进一步调节了该亚群的活化，降低了HLA-DR表达，同时保留了经典和促炎单核细胞频率，表明其具有选择性免疫调节作用而非广泛免疫抑制。

3F2衍生物重建MPV刺激所降低的NK亚群早期和晚期稳态活化标志物

MPV刺激未改变CD56^{Bright/dim/neg}NK细胞的百分比，但倾向于增加CD56^BrightCD16?NK细胞（一种具有增强细胞毒潜力和炎症反应性的过渡亚群）的比例。MPV刺激与CD56^Bright和CD16?CD56^BrightNK细胞中CD69和HLA-DR表达降低的趋势相关。3F2处理显著增加了CD56^BrightNK细胞中CD69表达（频率和gMFI）和HLA-DR表达（gMFI），并在CD16?CD56^BrightNK细胞中显著增加CD69表面表达（gMFI），表明3F2在MPV刺激期间调节CD56^BrightNK细胞亚群的活化表型，恢复NK细胞活化及其功能谱。

AMA和3F2衍生物部分恢复MPV诱导的NKT细胞活化标志物调节

MPV刺激显著降低了CD16?CD56?NKT细胞比例和CD69表达（gMFI），HLA-DR表达（gMFI）也呈下降趋势，与NKT细胞活化谱降低一致。AMA和3F2处理部分逆转了这种下调，将CD69表达恢复到接近基线水平。此外，MPV刺激增加了HLA-DR?NKT细胞频率，AMA减弱了这一效应。然而活化标志物的恢复未达到统计学显著性，表明在该实验条件下免疫调节作用有限。

AMA和3F2处理均未恢复MPV刺激后淋巴细胞受抑制的活化谱

MPV刺激导致总淋巴细胞频率略有增加，其中B细胞（CD3?CD19?）轻微上升但无活化证据。CD4?和CD8?T细胞亚群频率稳定，但活化状态明显降低。AMA或3F2处理均未能恢复淋巴细胞在对照组中观察到的活化谱。

3F2恢复MPV刺激后的固有免疫介质分泌

MPV刺激导致48种评估介质中39种水平下降，呈现典型的免疫逃逸特征。AMA处理促进更平衡的免疫介质调节，增加19种并减少25种。3F2处理则引发更广泛的免疫刺激效应，增强34种介质表达并减少13种，提示恢复被MPV刺激抑制的免疫活性。3F2显著或趋势性恢复了多种被MPV抑制的介质，包括CXCL8、IFN-γ、IL-12(p40)、IL-15、VEGF和NGF-β等。值得注意的是，MPV刺激增加了CCL2水平，3F2处理进一步提高了CCL2，提示单核细胞募集信号的放大。CXCL10在MPV刺激后增加，AMA处理可减弱之但3F2无此效应，表明AMA具有限制过度免疫活化的特异性免疫调节谱。

四、讨论与结论

研究人员指出，灭活MPV刺激PBMC所诱导的免疫应答可能涉及病毒病原体相关分子模式（PAMPs）被模式识别受体（包括Toll样受体和cGAS-STING通路）识别，随后激活NF-κB、MAPK和JAK/STAT信号通路。既往研究已证明灭活痘苗病毒可触发MEK/ERK和c-Fos表达的早期信号，表明病毒结构成分可独立于病毒复制激活宿主信号。此外，3F2作为与金刚烷胺相关的氨基金刚烷胺衍生物（已知NMDA受体抑制剂），NMDA相关信号与MAPK通路的潜在相互作用也可能有助于其免疫调节效应。

本研究存在局限性：使用化学和物理灭活的MPV不能完全复制具有复制能力病毒感染所诱导的复杂性；病毒制剂来自澄清的病毒储备液而未额外纯化，残留宿主细胞成分的潜在贡献不能完全排除；健康供体数量较少可能限制结果的普适性。

结论部分指出，本研究拓展了对AMA的3F2衍生物的认识，超越其既往报道的抗MPV活性。除损害病毒粒子组装外，3F2通过调节关键免疫细胞群（单核细胞、NK细胞和NKT细胞）并重新平衡参与抗病毒防御的免疫可溶性介质，恢复了被MPV刺激破坏的免疫应答。这种双重作用模式使3F2成为MPV感染的有前景治疗候选药物，具有同时影响病毒复制和逆转病毒诱导的免疫失调的潜力。