《Journal of Xenobiotics》：Dipyridamole Confers Renoprotection Against Rhabdomyolysis-Induced Acute Kidney Injury via Modulation of Oxidative Stress, the PKC/ET-1/PI3K/AKT Signaling Axis, and Apoptosis
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背景：横纹肌溶解（RM）诱导的急性肾损伤（RIAKI）是一种常见的临床并发症，其发病率不断上升。尽管有最佳护理，但由于药物治疗手段有限，病死率仍接近15%。双嘧达莫（DPM）是一种非选择性磷酸二酯酶抑制剂，具有抗氧化、抗炎和抗增殖特性。本研究旨在探讨DPM对甘
背景：横纹肌溶解（RM）诱导的急性肾损伤（RIAKI）是一种常见的临床并发症，其发病率不断上升。尽管有最佳护理，但由于药物治疗手段有限，病死率仍接近15%。双嘧达莫（DPM）是一种非选择性磷酸二酯酶抑制剂，具有抗氧化、抗炎和抗增殖特性。本研究旨在探讨DPM对甘油（GLY）诱导的RIAKI的保护作用，重点关注关键的AKI相关信号通路，包括蛋白激酶C（PKC）/内皮素-1（ET-1）/磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）/丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）级联反应，以及凋亡和增殖反应。方法：将大鼠随机分为五组：对照组、DPM对照组、GLY组、DPM（10 mg/kg）+GLY组和DPM（20 mg/kg）+GLY组。DPM腹腔注射给药8天。值得注意的是，DPM对照组接受20 mg/kg的DPM，未设DPM单独（10 mg/kg）组。24小时后，收集血液和肾脏。评估肾功能、氧化应激、组织病理学变化以及PKC/ET-1/PI3K/AKT/MAPK信号通路。此外，通过免疫组织化学评估凋亡标志物Bax和P53，以及增殖相关标志物Ki67和VEGFA。结果：DPM显著改善肾功能并保护肾组织结构。DPM减轻氧化应激，抑制PKC和ET-1，并调节PI3K/AKT/MAPK信号通路。此外，DPM下调Bax和P53，并降低Ki67和VEGFA，反映损伤相关信号减弱而非肾脏修复受损。结论：DPM通过多种互补机制对GLY诱导的RM相关AKI发挥肾脏保护作用。
# 双嘧达莫对横纹肌溶解致急性肾损伤的保护作用：从氧化应激到信号网络调控
## 一、研究背景与问题
急性肾损伤（AKI）是以肾功能快速下降为特征的严重临床综合征，可导致排泄能力受损及水电解质平衡紊乱。与无AKI患者相比，AKI患者发生慢性肾脏病（CKD）的风险增加8.8倍，终末期肾病风险增加3.1倍，死亡风险增加2.0倍。在AKI的众多病因中，横纹肌溶解（RM）约占10%–50%，是色素性肾病的主要原因。RM定义为骨骼肌急性破坏和肌纤维凋亡，随后肌细胞内容物释放入血，其中肌红蛋白的大量蓄积可导致肾小管阻塞、内皮功能障碍、血管收缩、氧化应激、炎症、凋亡及直接肾毒性，最终引发RM诱导的AKI（RIAKI）。RIAKI影响高达46%的住院RM患者及80%需重症监护的RM患者，即使接受最佳治疗，病死率仍超过15%，且过去十年发病率增长10倍。目前针对RIAKI的药物治疗手段有限，亟需探索新的肾脏保护策略。
已有证据表明蛋白激酶C（PKC）是RIAKI的治疗靶点。PKC激活后可触发肾小管凋亡并激活p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路。双嘧达莫（DPM）作为一种非选择性磷酸二酯酶抑制剂，除抗血小板作用外，还具有抗氧化、抗炎和抗增殖特性。既往研究显示DPM在次全肾切除大鼠中改善肾功能，在脓毒症AKI小鼠中通过cAMP/CREB信号减轻坏死性凋亡和肾脏炎症，临床上可减少糖尿病患者的尿白蛋白排泄。然而，DPM对RIAKI是否具有保护作用及其分子机制仍不清楚。因此，本研究利用甘油（GLY）诱导的RM大鼠模型，系统探讨DPM对RIAKI的保护作用，重点关注氧化应激、PKC/ET-1/PI3K/AKT/MAPK信号轴及凋亡与增殖反应。
## 二、主要技术方法
研究人员将30只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为5组：对照组、DPM对照组（20 mg/kg）、GLY模型组、DPM（10 mg/kg）+GLY组和DPM（20 mg/kg）+GLY组。DPM腹腔注射连续8天，第8天肌注50% GLY（10 mL/kg）建立RIAKI模型，24小时后收集血液和肾组织。采用生化试剂盒检测血清尿素氮（BUN）、肌酐和肌酸激酶-MB（CK-MB）；比色法检测肾组织丙二醛（MDA）、总抗氧化能力（TAC）和一氧化氮（NO）；ELISA检测肾组织PKC、ET-1、PI3K、p-AKT和MAPK蛋白含量；苏木精-伊红（H&E）染色进行组织病理学半定量评分；免疫组织化学（IHC）检测Bax、P53、Ki67和VEGFA蛋白表达，并使用ImageJ进行盲法半定量分析。
## 三、研究结果
### 3.1 对肾功能参数和血清CK-MB的影响
GLY组大鼠血清BUN、肌酐和CK-MB水平较对照组显著升高，表明严重肾功能损害和肌肉损伤。DPM（10和20 mg/kg）预处理显著降低这些指标，且DPM对肌酐的降低呈剂量依赖性，20 mg/kg剂量组接近正常值。
### 3.2 对肾脏组织病理学的影响
对照组肾实质结构正常。GLY组显示广泛的肾损伤，包括明显肾小管坏死、小管上皮皱缩伴核固缩、严重小管肿胀伴胞质苍白、大量腔内嗜酸性透明管型混合嗜碱性钙颗粒、局灶性肾小球袢坏死、间质纤维化和丰富炎性浸润。DPM治疗组肾小管损伤明显减轻，DPM 20 mg/kg组肾组织结构保存较好，半定量评分显著低于GLY组。
### 3.3 对氧化应激标志物的影响
GLY组肾组织MDA和NO水平显著升高，TAC显著降低。DPM（10和20 mg/kg）治疗以剂量依赖性方式显著降低MDA和NO水平，并恢复TAC水平，表明DPM具有显著的抗氧化活性。
### 3.4 对肾组织PKC和ET-1蛋白含量的影响
GLY组肾组织PKC和ET-1蛋白含量较对照组显著升高。DPM（10和20 mg/kg）治疗显著降低GLY诱导的PKC和ET-1升高，提示DPM抑制PKC/ET-1信号轴的激活。
### 3.5 对PI3K、p-AKT和MAPK信号轴的影响
GLY组MAPK水平较对照组显著升高，DPM（20 mg/kg）显著降低MAPK水平。PI3K和p-AKT水平在GLY组显著升高，DPM以剂量依赖性方式减弱两者水平。这些结果表明DPM调节PI3K/AKT/MAPK信号通路，可能与减轻损伤相关信号有关。
### 3.6 对肾组织Bax和P53蛋白表达的影响
GLY组肾组织促凋亡蛋白Bax和P53的免疫组化表达显著增加，DPM（10和20 mg/kg）治疗显著下调这两种凋亡标志物的表达，表明DPM抑制内在凋亡通路。
### 3.7 对肾组织Ki67和VEGFA蛋白表达的影响
GLY组Ki67（增殖标志物）和VEGFA（血管生成因子）表达较对照组显著增加。DPM预处理以剂量依赖性方式显著降低GLY诱导的Ki67和VEGFA升高。研究认为这种降低反映DPM抑制过度损伤驱动的增殖和血管生成信号，而非损伤正常修复过程。
## 四、讨论与结论
本研究证实DPM对GLY诱导的RIAKI具有显著肾脏保护作用，表现为改善肾功能、保护肾组织结构、减轻氧化应激、降低凋亡标志物并调节细胞存活通路，且呈剂量依赖性。其保护机制可能包括：通过非选择性抑制磷酸二酯酶和细胞腺苷摄取，增加细胞外腺苷水平及细胞内cAMP和cGMP信号，增强NO介导的血管舒张和组织灌注；直接清除自由基并激活内源性抗氧化通路；抑制PKC激活及其下游ET-1和PI3K/AKT信号传导，减轻血管收缩和病理性增殖信号。
在凋亡方面，DPM通过下调Bax和P53抑制线粒体凋亡通路，与组织学上减少肾小管变性和坏死相一致。对于Ki67和VEGFA的降低，研究强调需结合单一24小时时间点进行解读，这些变化可能反映损伤相关信号的减弱而非修复受损，DPM可能恢复了更受控的细胞更新模式。研究局限性包括仅在伤后24小时评估增殖/血管生成标志物、缺乏PI3K/AKT特异性抑制剂或基因沉默实验，以及未设DPM 10 mg/kg单独给药组。
结论：DPM通过多种互补机制（抗氧化应激、调节PKC/ET-1/PI3K/AKT/MAPK信号轴、抑制凋亡及调节异常增殖信号）对GLY诱导的RM相关AKI发挥剂量依赖性肾脏保护作用，有望成为RIAKI的潜在治疗药物。未来研究需延长观察时间、采用通路特异性抑制剂及基因干预手段以进一步确证机制。
