阑尾上皮病变中VEGF-A免疫组化表达的回顾性探索性研究

《Medical Sciences》：VEGF-A Immunohistochemical Expression Across Appendiceal Epithelial Lesions: A Retrospective Exploratory Study

　　

背景： 阑尾上皮病变罕见且具有异质性。关于血管内皮生长因子A在局限性阑尾病变中表达的证据有限。研究人员比较了不同诊断亚型之间的VEGF-A免疫反应性，并探讨了其与组织学特征的关联。方法： 这项回顾性探索性研究纳入了73例阑尾肿瘤性上皮病变。研究人员评估了福尔马林固定石蜡包埋组织中主要的VEGF-A染色强度和阳性肿瘤性上皮细胞的百分比，并将两者的乘积报告为改良免疫反应评分（范围0–300）。采用了基于置换的非参数检验、Benjamini–Hochberg校正、诊断调整敏感性分析和观察者间一致性分析。结果： 71/73例病例呈现VEGF-A染色。腺癌、增生性息肉、低级别阑尾黏液性肿瘤和无蒂锯齿状病变的改良免疫反应评分中位数分别为205、170、180和100；总体差异不显著（p = 0.073）。经错误发现率校正后，无任何组织学特征关联保持显著。表面上皮核分层在全局分析中不显著（p = 0.051；q = 0.169），且在诊断调整后亦不显著（p = 0.282）。VEGF-A测量值在急性和偶然表现之间无差异；急性表现患者更年轻（p = 0.006）。结论： VEGF-A免疫反应性常见，但未识别出稳健的亚型特异性或组织学特异性模式。这些探索性发现未能确立临床实用性，需在更大规模对照队列中进行验证。

研究背景与目的

阑尾上皮病变是一类罕见的异质性疾病，包括增生性息肉、无蒂锯齿状病变、低级别阑尾黏液性肿瘤和腺癌等生物学行为迥异的实体。这些病变的临床表现常非特异，多在因急性阑尾炎行阑尾切除术后、其他腹部手术中偶然发现，或因播散性黏液性疾病检查时被发现。准确的分类对于指导治疗至关重要，因为不同病变的生物学行为和处理策略差异显著。

血管内皮生长因子A是肿瘤血管生成的关键配体，主要通过VEGF受体特别是VEGFR-2发挥作用。缺氧和炎症可诱导VEGF-A信号通路，同时VEGF-A可能影响抗肿瘤免疫应答。然而，现有针对阑尾肿瘤的生物标志物证据极为有限。既往最相关的阑尾研究集中在晚期疾病，如一项研究报道VEGF免疫反应性与腹膜转移性黏液性阑尾腺癌患者的生存相关，另一项则评估了阑尾癌病中的VEGFR-2而非VEGF-A。尚无研究系统描述VEGF-A在局限性阑尾上皮病变谱系中的表达模式。

因此，研究人员旨在估算VEGF-A在不同局限性阑尾肿瘤性上皮病变亚型中的免疫组化表达水平，并探索其与特定结构、细胞学、黏液相关、炎症及增殖特征的关联。本研究设计为回顾性探索性分析，而非对诊断、预后或预测性生物标志物的验证。

研究方法

这是一项在克罗地亚斯普利特大学医院病理科和外科开展的回顾性观察研究。研究人员从2017年1月1日至2021年12月31日期间接受手术治疗的患者档案中筛选出73例符合条件的阑尾肿瘤性上皮病变，包括4例腺癌、9例增生性息肉、17例LAMN和43例SSL。所有诊断均依据2019年WHO消化系统肿瘤分类。研究人员采用标准化免疫组化方案对福尔马林固定石蜡包埋切片进行VEGF-A染色，胎盘组织作为外部阳性对照。两位经验丰富的胃肠病理学家独立盲法评估主要的VEGF-A染色强度（0–3级）和阳性肿瘤性柱状上皮细胞百分比，两者乘积计算为改良免疫反应评分（0–300分）。统计学方法包括基于置换的非参数检验、Benjamini–Hochberg错误发现率校正、诊断分层敏感性分析以及线性加权Cohen's kappa和组内相关系数评估观察者间一致性。

研究结果

3.1 患者特征与阑尾肿瘤中VEGF-A染色情况

共筛查2832份病理报告，最终纳入73例。VEGF-A染色见于71/73例病例。全队列中强染色占42.5%，中度染色占31.5%，弱染色占23.3%，阴性占2.7%。观察者间一致性极高：强度线性加权κ=0.913，百分比阳性ICC(A,1)=0.963，改良评分ICC(A,1)=0.979。各诊断组间主要染色强度无显著差异，阳性细胞百分比也无差异。改良免疫反应评分中位数在腺癌为205，增生性息肉170，LAMN 180，SSL 100，总体比较未达统计学显著性（p=0.073）。有丝分裂活性在各诊断组间存在差异，腺癌显著高于增生性息肉、LAMN和SSL。

3.2 柱状黏膜细胞中VEGF-A染色强度与组织学特征的关系

由于许多特征-强度列联表稀疏，采用蒙特卡罗精确型置换结果。经多重性校正后，无任何组织学特征与主要VEGF-A染色强度显著相关。最小的精确型p值出现在炎症浸润严重度（p=0.064），但所有强度家族q值均≥0.639。

3.3 改良VEGF-A免疫反应评分与组织学特征的关系

在十个探索性组织学特征中，无任何特征与改良免疫反应评分的关联达到错误发现率阈值。基底隐窝扩张在全局检验中名义显著（p=0.029），但未通过多重性校正（q=0.144），且在诊断调整敏感性分析中也不显著（p=0.107；q=0.358）。表面上皮核分层呈非单调模式，全局检验未达显著性（p=0.051；q=0.169），Holm校正配对比较均不显著，诊断调整分析同样不显著（p=0.282；q=0.524）。核异型性具有最小的未校正p值（p=0.007），但多重性校正后略超预设阈值（q=0.067），诊断调整后仍为名义显著（p=0.019）但校正后不显著（q=0.186）。

3.4 有丝分裂活性与探索性组织学关联

在诊断调整的秩置换敏感性分析中，无任何组织学特征与有丝分裂活性的关联在多重性校正后保持显著。改良VEGF-A免疫反应评分与有丝分裂活性无显著相关性（Spearman ρ=0.203，p=0.085）。

3.5 急性与偶然表现的比较

VEGF-A测量值在急性表现和偶然表现组之间无差异。急性表现患者年龄中位数更小（64岁 vs 71岁，p=0.006）。在调整诊断和年龄的秩置换模型中，表现方式与改良评分仍无关联（p=0.703）。

讨论与结论

本研究的核心发现是VEGF-A免疫反应性在局限性阑尾上皮病变中普遍存在，但染色强度、阳性细胞百分比和改良免疫反应评分在各诊断亚型间无确定性差异。SSL的中位评分看似较低，但不足以支持亚型特异性解释。所有十个组织学特征与改良评分的关联经错误发现率校正后均不显著。表面上皮核分层和核异型性虽在未校正分析中显示一定趋势，但经多重性校正和诊断调整后均失去统计学意义。炎症浸润和急性/偶然表现也与VEGF-A指标无稳健关联。

研究结论： 在本研究检查的局限性阑尾上皮肿瘤谱系中，VEGF-A免疫反应性频繁观察到，主要为中度至强度染色。未发现亚型特异性差异的统计学显著证据，但小而分布不均的诊断组排除了等效性结论。同样，腺癌、增生性息肉、LAMN和无蒂锯齿状病变之间的总体VEGF-A免疫反应评分无显著差异，尽管腺癌显示出最高的中位免疫反应评分，无蒂锯齿状病变最低。大多数评估的结构、黏液相关和炎症特征与VEGF-A表达亦不一致。基底隐窝扩张和表面上皮核分层在多重性校正、配对检验或诊断调整后均不与VEGF-A相关。总之，这些发现支持VEGF-A表达是局限性阑尾上皮肿瘤的共同特征，而非明确与特定组织学表型相关的标志物。观察到的关联应视为探索性，尤其是在诊断和组织学亚组小而分布不均的情况下。需要更大规模的研究来确定VEGF-A在阑尾肿瘤生物学和进展中是否具有有意义的作用。