《Human Gene》：RIPK3 mRNA expression in paired colorectal tumor and adjacent normal tissues: Associations with clinicopathological characteristics and exploratory external survival analysis
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摘要目标受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3（RIPK3）参与坏死性凋亡和炎症信号传导，但其在大肠癌中的表达及临床病理相关性仍未完全阐明。本研究评估了配对结直肠肿瘤组织和邻近正常组织中的RIPK3 mRNA表达，并考察其与临床病理特征之间的关联。此外，还使用公开的大肠癌数据进
摘要
目标
受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3（RIPK3）参与坏死性凋亡和炎症信号传导，但其在大肠癌中的表达及临床病理相关性仍未完全阐明。本研究评估了配对结直肠肿瘤组织和邻近正常组织中的RIPK3 mRNA表达，并考察其与临床病理特征之间的关联。此外，还使用公开的大肠癌数据进行了探索性外部总生存期分析。
材料与方法
从49例经组织病理学确诊的大肠癌患者中获取配对的肿瘤组织和邻近正常组织。采用逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）定量RIPK3 mRNA表达，以ACTB作为参考基因。归一化表达以循环阈值差值（ΔCt）表示，患者内肿瘤与正常组织的表达变化以log2倍数变化（log2FC）汇总。使用配对t检验比较肿瘤和邻近正常组织的ΔCt值，并以Wilcoxon符号秩检验进行敏感性分析。使用患者水平的log2FC值评估了五项预指定的临床病理比较，并采用Benjamini-Hochberg错误发现率（FDR）校正。使用癌症基因组图谱（TCGA）结肠腺癌和直肠腺癌队列，通过基因表达谱交互分析3（GEPIA3）进行总体生存期探索性分析。
结果
肿瘤中的平均ΔCt为6.86 ± 2.02，配对邻近正常组织中的平均ΔCt为6.25 ± 0.95。平均肿瘤与正常组织差异为0.61个循环（95%置信区间[CI]，0.13至1.08；配对p = 0.013），对应几何平均肿瘤/正常倍数变化为0.66。49例患者中有32例（65.3%）出现肿瘤表达降低。Wilcoxon符号秩敏感性分析得出了一致结果（p = 0.017）。与N0/NX组合组相比，N1-N2组表现出更大的下调（平均差异，?1.19 log2单位；95% CI，?2.07至?0.32；FDR校正后p = 0.041）。在多重性校正后，与肿瘤大小、分组组织学分级、T分期和M分期的关联无统计学意义。在376例患者的探索性外部分析中，单变量Cox比例风险模型显示较高的RIPK3表达与较长的总生存期相关（风险比[HR]，0.61；95% CI，0.39至0.95；p = 0.027）。
结论
RIPK3 mRNA在大肠癌肿瘤中表达轻度降低，且更大的下调与淋巴结受累相关。外部生存期结果支持对RIPK3预后相关性进行进一步研究，但未确立其独立的预后价值，因为未进行多变量校正。需要蛋白水平和功能学研究来确定观察到的转录本水平差异是否反映了坏死性凋亡信号传导的改变。
引言
大肠癌（CRC）是诊断最常见的恶性肿瘤之一，也是全球癌症相关死亡的主要原因。尽管在筛查、手术和全身治疗方面取得了进展，仍有相当一部分患者最初即患有或最终发展为晚期疾病，大肠癌仍是全球重大健康负担（Arnold等，2017；Siegel等，2017）。大肠癌的发生是一个多步骤过程，由遗传和表观遗传改变的积累驱动，这些改变破坏了正常的上皮稳态（Moradi等，2022；Nili等，2025；Shavali等，2024）。经典腺瘤-癌序列最初由Fearon和Vogelstein描述，阐明了从正常黏膜经腺瘤到浸润性癌的进展过程，由抑癌基因（如APC和TP53）和癌基因（如KRAS）的序贯突变推动（Grady和Pritchard，2014）。随后的基因组研究证实了这些通路的中心地位，同时也揭示了大肠癌的大量分子异质性，强调了界定有助于肿瘤进展和转移的额外机制的必要性（Duan等，2022）。
在癌症的标志性特征中，逃避程序性细胞死亡是恶性肿瘤转化和治疗耐药的关键促成因素（Vogelstein等，1988）。在大肠癌中，对凋亡的抵抗通常源于TP53的改变、BCL-2家族蛋白的失调以及caspase级联反应的障碍，使恶性细胞能够耐受基因毒性和微环境应激。由于许多传统化疗药物依赖凋亡来消除肿瘤细胞，凋亡抵抗是治疗失败和疾病复发的主要决定因素。这些局限性激发了人们对非凋亡形式的调控性细胞死亡作为替代治疗靶点的日益增长的兴趣（Tomasetti等，2015；Tong等，2022）。
坏死性凋亡是一种调控性的坏死形式，在机制上与凋亡和自噬不同，但与凋亡共享一套定义明确的信号装置（Najafov等，2017）。与凋亡通常免疫沉默的特性不同，坏死性凋亡具有高度促炎性，最终以质膜破裂和释放损伤相关分子模式（DAMPs）告终，后者可激活先天性和适应性免疫反应（Mármol等，2017）。坏死性凋亡由一个核心信号模块编排，涉及受体相互作用蛋白激酶1和3（RIPK1和RIPK3）以及混合谱系激酶结构域样伪激酶（MLKL）。在死亡受体配体（如肿瘤坏死因子-α）或模式识别受体的刺激下，且在caspase-8抑制的背景下，RIPK1和RIPK3组装成一种称为坏死体的多蛋白复合物。在该复合物内，RIPK3被激活并磷酸化MLKL，随后MLKL寡聚化并转位至质膜形成孔隙，导致膜完整性丧失和溶解性细胞死亡（Najafov等，2017；Galluzzi等，2018；Gong等，2019）。
坏死性凋亡和RIPK3在癌症中的作用复杂且具有背景依赖性，越来越多的证据支持其具有抑癌和促肿瘤双重功能。一方面，RIPK3的缺失或下调已在多种肿瘤类型中被报道，包括大肠癌，其中RIPK3缺失经常与晚期、转移和不良临床预后相关（Mármol等，2017）。小鼠肠道肿瘤发生模型的研究支持RIPK3具有肿瘤限制作用，因为RIPK3缺陷与肿瘤发展和肿瘤负荷增加相关（Zhao等，2021）。
另一方面，在慢性炎症背景下（如结肠炎相关性大肠癌），坏死性凋亡可以通过驱动持续性炎症和肿瘤微环境的免疫抑制重塑而悖论性地促进肿瘤发生。相反，RIPK3相关的坏死性凋亡和炎症信号传导可能在特定生物条件下促进肿瘤微环境中的慢性炎症和免疫抑制性改变（Mármol等，2017；Galluzzi等，2018）。这些发现强调，RIPK3介导的坏死性凋亡对癌症生物学的净效应反映了其消除恶性细胞的能力与塑造肿瘤微环境中炎症和免疫反应的能力之间的平衡（Liu等，2021；Su等，2025；Vandenabeele等，2010）。
在此框架下，人类大肠癌中RIPK3的表达模式和临床病理相关性引起了关注。先前的研究报告了大肠癌肿瘤中RIPK3表达降低，以及与组织学分级、淋巴转移和临床预后的关联。然而，RIPK3表达降低的生物学和临床意义仍不确定，因为RIPK3同时参与细胞死亡和炎症信号传导，且其功能可能因肿瘤类型、细胞起源、免疫背景和通路活性而异（Zhao等，2021；Feng等，2015）。
本研究定量测定了配对结直肠肿瘤组织和邻近正常组织中的RIPK3 mRNA表达，并评估了其与选定临床病理特征的关联。采用配对设计以估计患者内肿瘤相关表达变化。此外，使用公开的大肠癌数据进行了探索性外部分析，以考察RIPK3表达与总生存期之间的关系。由于机构队列缺乏纵向结局，且外部Cox分析未调整，本研究并非旨在确立RIPK3作为独立的预后生物标志物。
章节片段
研究设计与患者
本横断面研究纳入49例经组织病理学确诊的原发性大肠癌患者，他们于2022年至2024年间在伊朗德黑兰伊玛目霍梅尼医院癌症研究所接受手术切除。纳入标准是可获得足够质量的配对肿瘤组织和邻近正常组织用于分子分析。排除标准为：接受过新辅助化疗或放疗的患者，或有其他侵袭性恶性肿瘤病史的患者。
临床病理特征
队列包括49例大肠癌患者。24例患者（49.0%）年龄小于50岁，33例（67.3%）为男性。30例患者（61.2%）肿瘤大于5.5厘米，27例（55.1%）为3-4级肿瘤。33例患者（67.3%）为T3-T4期，21例（42.9%）为N1-N2期，8例（16.3%）为M1期。完整的临床病理特征见表1。
配对肿瘤和邻近正常组织中的RIPK3 mRNA表达
结直肠肿瘤中的平均ΔCt为6.86 ± 2.02，配对邻近正常组织中的平均ΔCt为6.25 ± 0.95。
讨论
本研究显示，与患者匹配的邻近正常组织相比，结直肠肿瘤组织中的RIPK3 mRNA表达显著降低。几何平均肿瘤/正常倍数变化为0.66，49例患者中有32例显示表达降低。这些发现表明RIPK3表达存在轻度和异质性降低，而非所有结直肠肿瘤中一致的下调。我们的肿瘤-正常发现与先前报道RIPK3降低的研究一致。
CRediT作者贡献声明
Ali Jalalian：调查。Hamid Reza Ghasemi Basir：撰写——初稿。Elham Khanlarzadeh：形式分析、数据管理。Kamal Mohammadian：撰写——审阅与编辑、撰写——初稿、监督、概念化。
利益冲突声明
作者声明他们不存在可能影响本文所述工作的已知竞争性经济利益或个人关系。
致谢
作者感谢Arash Moradi, M.Sc.在本研究分子生物学方面提供的宝贵指导，以及对研究结果生物学解释的富有洞察力的讨论。
Ali Jalalian|Hamid Reza Ghasemi Basir|Elham Khanlarzadeh|Kamal Mohammadian
