迷迭香酸-表没食子儿茶素没食子酸酯富集提取物（RE-GTE）改善咖啡因和PCPA诱导的失眠与睡眠-觉醒平衡

《Biomedicine & Pharmacotherapy》：Rosmarinic acid- and epigallocatechin gallate-enriched extracts improve insomnia and sleep-wake balance in caffeine-and p-chlorophenylalanine-induced insomnia models

　　

迷迭香酸（rosmarinic acid, RA）和表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate, EGCG）富集提取物可改善咖啡因和对氯苯丙氨酸（p-chlorophenylalanine, PCPA）诱导的失眠模型中的失眠和睡眠-觉醒平衡。研究人员将RE-GTE（SleafRG?）配制成迷迭香-绿茶提取物1:1（w/w）混合物。在两种失眠模型中，高剂量RE-GTE延长了戊巴比妥（pentobarbital）诱导的睡眠时间。RE-GTE改变了咖啡因处理小鼠的GABA能（GABAergic）和腺苷能（adenosinergic）标志物。RE-GTE提高了PCPA模型小鼠的血清素（serotonin）和褪黑素（melatonin）水平，并降低了皮质酮（corticosterone）水平。这些通路水平的相关性表明RE-GTE具有多靶点潜力。

睡眠和睡眠-觉醒障碍已成为全球日益严重的公共卫生问题，与过量咖啡因摄入、慢性压力及神经化学失调密切相关。咖啡因通过拮抗腺苷受体，延迟入睡、缩短总睡眠时间并抑制慢波睡眠；内源性5-羟色胺（5-HT）耗竭则会破坏睡眠-觉醒稳态。对氯苯丙氨酸（PCPA）作为色氨酸羟化酶抑制剂，可降低中枢5-HT水平并诱导睡眠障碍，同时5-HT减少常伴随下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴功能亢进。由于失眠涉及GABA能、腺苷能、血清素能和食欲素能等多条睡眠-觉醒调节通路，单一分子靶向策略可能不足以应对其复杂病因。迷迭香酸（RA）具有抗焦虑和神经保护作用，并调节γ-氨基丁酸（GABA）相关信号；表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）可通过GABA能信号减弱应激反应，但两者联合应用于不同病因失眠模型的证据仍然有限。因此，研究人员将RA富集的迷迭香提取物（RE）与EGCG富集的绿茶提取物（GTE）以1:1（w/w）比例混合为RE-GTE（SleafRG?），在咖啡因诱导和PCPA诱导的两种失眠模型中评估其对睡眠行为、焦虑相关行为、应激激素、神经递质及睡眠/觉醒相关受体蛋白的影响。

方法上，研究人员使用6周龄雄性ICR小鼠（购自韩国Orient Bio）并分组（每组8只）。咖啡因诱导模型通过饮水给予咖啡因（40 mg/kg/天）两周，同时设正常组（NOR）、咖啡因对照组（CAF）、GABA对照组（GABA，100 mg/kg）、RE-GTE低剂量组（ML，20 mg/kg）和高剂量组（MH，40 mg/kg）。PCPA诱导模型先随机环境应激14天，再腹腔注射PCPA（400 mg/kg/天）两天，设组同前。行为学评估采用戊巴比妥诱导睡眠试验（戊巴比妥42 mg/kg）、高架十字迷宫（EPM）和旷场试验（OFT）。咖啡因模型使用全脑匀浆检测多巴胺（DA）和GABA，并用Western blot检测GABA_A受体（GABA_AR）、腺苷A₁受体（A₁AR）和A_2A受体（A_2AAR）；PCPA模型使用下丘脑组织ELISA检测5-HT、褪黑素（ME）、去甲肾上腺素（NE）和食欲素A，血清检测促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、促肾上腺皮质激素（ACTH）和皮质酮（CORT），并用Western blot检测5-羟色胺受体1A（HTR1A）和食欲素受体2（OX2R）。数据采用单因素方差分析（ANOVA）和Tukey事后检验。

结果如下：

3.1 咖啡因诱导失眠模型中RE-GTE对睡眠行为的影响：戊巴比妥诱导睡眠试验显示，CAF组睡眠时长较NOR显著缩短，而睡眠潜伏期无显著差异；MH组睡眠潜伏期显著短于CAF组，且RE-GTE以剂量依赖方式延长睡眠时长，MH组达到显著水平。

3.2 咖啡因诱导失眠模型中RE-GTE对焦虑相关及运动行为的影响：EPM中，CAF组开放臂时间较NOR显著减少；RE-GTE两剂量均显著增加开放臂时间和进入次数，而总运动距离无组间差异。OFT中，CAF组总距离和运动时间显著减少；MH组总距离恢复，ML和MH组运动时间恢复。

3.3 咖啡因诱导失眠模型中RE-GTE对神经递质水平的影响：CAF组全脑DA显著升高，RE-GTE两剂量均显著降低DA；CAF组GABA有下降趋势但不显著，MH组GABA显著升高。

3.4 咖啡因诱导失眠模型中RE-GTE对睡眠/觉醒相关受体蛋白水平的影响：CAF组GABA_AR显著降低，A₁AR和A_2AAR显著升高；RE-GTE两剂量均显著升高GABA_AR并降低A₁AR和A_2AAR。

3.5 PCPA诱导失眠模型中RE-GTE对睡眠行为的影响：PCPA组睡眠潜伏期显著增加、睡眠时长显著减少；RE-GTE两剂量均显著增加睡眠时长，睡眠潜伏期仅呈降低趋势。

3.6 PCPA诱导失眠模型中RE-GTE对焦虑相关及运动行为的影响：EPM中，PCPA组开放臂时间和进入次数显著减少；MH组开放臂时间显著增加，ML和MH组进入次数均显著增加。OFT中，PCPA组总距离和运动时间显著减少；ML和MH组均显著增加总距离和运动时间。

3.7 PCPA诱导失眠模型中RE-GTE对应激激素和神经递质的影响：PCPA组血清CRH、ACTH和CORT均显著升高；RE-GTE两剂量均显著降低CORT，仅MH组显著降低ACTH。PCPA组下丘脑5-HT和ME显著降低，RE-GTE两剂量均显著升高两者；PCPA组NE和食欲素A显著升高，但RE-GTE对NE无显著影响，对食欲素A仅呈降低趋势。

3.8 PCPA诱导失眠模型中RE-GTE对睡眠/觉醒相关受体蛋白水平的影响：PCPA组HTR1A显著降低、OX2R显著升高；MH组HTR1A显著升高，ML和MH组OX2R均显著降低。

讨论部分指出，RE-GTE在咖啡因模型中伴随GABA能、腺苷能和多巴胺能标志物的改变，在PCPA模型中伴随血清素能、褪黑素能、食欲素能和HPA轴相关标志物的选择性变化，但这些都是通路水平的相关性，不足以证明直接靶向或因果调控。研究局限性包括未进行通路特异性干预、未设置RE或GTE单独组、GABA仅作为功能对照且口服生物利用度有限、两种模型使用了不同脑组织、且未通过脑电图/肌电图评估睡眠结构或检测核心时钟基因。总之，RE-GTE可能作为改善睡眠障碍的有前景的天然候选物，但其作用背后的通路需进一步的因果验证。