基于抗PDCoV刺突蛋白纳米抗体的双抗体夹心ELISA方法的建立与临床验证

《BMC Veterinary Research》：Novel double-antibody sandwich ELISA based on nanobody against spike protein for the detection of porcine deltacoronavirus

摘要

背景

猪 D 型冠状病毒（PDCoV）是一种新兴的肠道冠状病毒，可引起新生仔猪腹泻、呕吐、脱水和死亡，严重危害全球养猪业。然而，目前尚无用于基层临床实践的商业化 PDCoV 抗原检测 ELISA 试剂盒。因此，建立一种快速、准确且实用的抗原检测方法对于基层养猪场的 PDCoV 监测、预防和控制具有重要意义。

结果

本研究开发了一种双抗体夹心酶联免疫吸附测定（DAS-ELISA）方法，使用抗 PDCoV 刺突蛋白纳米抗体 Nb1 和 Nb17 检测 PDCoV 抗原。Nb17 作为捕获抗体，与辣根过氧化物酶偶联的 Nb1（Nb1–HRP）作为检测抗体。使用我们的 DAS-ELISA 方法对活病毒和病毒培养上清液进行检测；该方法能够检测到低至 102·? TCID??/mL 感染滴度的病毒。同时，基于公式的计算显示，纯化的 S 蛋白最低检测浓度为 0.49 ng/mL。特异性测试表明，DAS-ELISA 检测方法与猪流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒、猪急性腹泻综合征冠状病毒或猪轮状病毒均无交叉反应。组内和组间变异系数均 < 10%，表明该方法具有良好的重复性。使用该方法测试了 172 份临床猪样本，与实时荧光定量 PCR 的一致性率为 93.60%，Kappa（κ）值为 0.87，表明两种检测方法之间具有高度的一致性。

结论

本研究建立的 DAS-ELISA 是检测临床样本中 PDCoV 抗原的可靠工具。

背景

猪 D 型冠状病毒（PDCoV）是一种新兴的肠道冠状病毒，可引起新生仔猪腹泻、呕吐、脱水和死亡，严重危害全球养猪业。然而，目前尚无用于基层临床实践的商业化 PDCoV 抗原检测 ELISA 试剂盒。因此，建立一种快速、准确且实用的抗原检测方法对于基层养猪场的 PDCoV 监测、预防和控制具有重要意义。

结果

本研究开发了一种双抗体夹心酶联免疫吸附测定（DAS-ELISA）方法，使用抗 PDCoV 刺突蛋白纳米抗体 Nb1 和 Nb17 检测 PDCoV 抗原。Nb17 作为捕获抗体，与辣根过氧化物酶偶联的 Nb1（Nb1–HRP）作为检测抗体。使用我们的 DAS-ELISA 方法对活病毒和病毒文化上清液进行检测；该方法能够检测到低至 102·? TCID??/mL 感染滴度的病毒。同时，基于公式的计算显示，纯化的 S 蛋白最低检测浓度为 0.49 ng/mL。特异性测试表明，DAS-ELISA 检测方法与猪流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒、猪急性腹泻综合征冠状病毒或猪轮状病毒均无交叉反应。组内和组间变异系数均 < 10%，表明该方法具有良好的重复性。使用该方法测试了 172 份临床猪样本，与实时荧光定量 PCR 的一致性率为 93.60%，Kappa（κ）值为 0.87，表明两种检测方法之间具有高度的一致性。

结论

本研究建立的 DAS-ELISA 是检测临床样本中 PDCoV 抗原的可靠工具。