辛可尼定通过SRC/RAF1/NF-κB通路减轻线粒体功能障碍，改善创伤性脑损伤相关的神经行为缺陷

《Neurochemical Research》：Cinchonidine Ameliorates Traumatic Brain Injury-Related Neurobehavioral Deficits via the SRC/RAF1/NF-κB Pathway to Attenuate Mitochondrial Dysfunction

　　

摘要

辛可尼丁（CD）是一种源自肠道微生物群的代谢产物，在保护创伤性脑损伤（TBI）方面显示出前景，其中线粒体功能障碍是继发性损伤的关键驱动因素。使用控制性皮质冲击（CCI）小鼠模型和体外原代神经元损伤模型，给予 CD 使 TBI 小鼠的生理状态（体重恢复、心率稳定）和行为结果（行程距离和速度增加）得到改善。组织学分析显示海马神经元损伤减轻，促炎细胞因子（白介素 -1β、白介素 -6 和肿瘤坏死因子 -α）减少，血脑屏障紧密连接蛋白（Claudin-5、Occludin、封闭紧密连接 -1）上调。线粒体功能得到改善，证据包括线粒体 DNA 拷贝数增加，外线粒体膜转位酶 20 和细胞色素 c 氧化酶亚基 IV 表达升高，以及线粒体膜电位恢复。此外，CD 减轻了 TBI 引起的线粒体动力学和生物发生变化，恢复了磷酸化动力蛋白相关蛋白 1（p-DRP1）/DRP1 比率以及线粒体融合蛋白 1/2（MFN-1/2）和过氧化物酶体增殖物激活受体 γ 辅激活因子 1-α（PGC-1α）的表达，同时减少了线粒体 DRP1。网络药理学鉴定原癌基因酪氨酸蛋白激酶 Src（SRC）为关键靶点，并通过分子对接和药物亲和力响应靶标稳定性测定验证了其稳定结合。此外，细胞热转移测定表明 CD 与 SRC 之间存在直接相互作用。CD 治疗抑制了 SRC/RAF 原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（RAF1）/核因子 kappa B（NF-κB）信号轴的激活，证据是 SRC 和 p65 的磷酸化减少，以及 RAF1 和裂解的 Caspase-3 表达降低。至关重要的是，SRC 敲低模拟了 CD 的保护作用，而 SRC 过表达则消除了其益处。这些发现表明，CD 通过抑制 SRC 激酶活性及其下游 RAF1/NF-κB 信号通路，改善了 TBI 后的线粒体功能障碍、神经炎症和神经元损伤。因此，CD 可能代表一种针对 SRC 的有前景的 TBI 神经保护策略。