Borrelia miyamotoi 人类暴露中血清反应性超过 Borrelia burgdorferi s.l. 而蜱中相反：哈萨克斯坦东南部整合血清学、昆虫学与分子研究

《Ticks and Tick-borne Diseases》：Borrelia miyamotoi exceeds Borrelia burgdorferi sensu lato in human exposure despite the opposite in ticks: an integrated serological, entomological and molecular study in southeastern Kazakhstan

　　

研究人员发现，在哈萨克斯坦东南部，Borrelia miyamotoi的血清反应性超过Borrelia burgdorferi sensu lato (s.l.)；而在Ixodes persulcatus中，B. burgdorferi s.l.的检出率高于B. miyamotoi。单层酶联免疫吸附试验（ELISA）与两种正交检测方法在27份基线阳性样本中均未取得一致结果。28名参与者中有3名在移除Borrelia DNA阳性蜱后发生血清转换。该研究首次在哈萨克斯坦报道了经分子和血清学证实的B. miyamotoi感染。

论文解读：哈萨克斯坦东南部疏螺旋体暴露的整合血清学、昆虫学与分子研究

莱姆病（Lyme borreliosis, LB）由Borrelia burgdorferi sensu lato (s.l.)引起，硬蜱传回归热则主要由Borrelia miyamotoi导致，二者均为北半球常见的蜱传细菌感染。B. miyamotoi病尽管地理分布广泛，却因临床表现非特异和特异性检测手段缺乏而严重漏诊。准确的LB血清学诊断需要两步法，即第一层酶免疫测定（enzyme immunoassay, EIA）阳性后必须经免疫印迹或针对不同抗原的第二层EIA确认。然而在哈萨克斯坦，常规诊断仅依赖单层LymeBest ELISA（Vector-Best, Russia）而无任何确认步骤；B. miyamotoi则完全没有可用的血清学或分子检测项目。先前研究已显示哈萨克斯坦南部和东南部存在疏螺旋体自然疫源地，但缺乏跨临床和人群组的整合比较，既往血清学调查全部基于单层EIA，附着蜱中的病原体检测与被叮咬个体血清学转换之间的关系亦未被系统评估。

研究人员开展了一项横断面、多中心研究，于2024年3月至2026年4月间从Almaty、Jetisu、Zhambyl和Turkistan四个地区招募1300名参与者，覆盖不明原因发热、近期蜱咬后发热、成人和儿童脑膜脑炎、不明原因慢性神经或关节疾病、表面健康个体、近12个月内有蜱咬史者以及现场移除附着蜱者。研究以多抗原蛋白阵列、LymeBest ELISA、Anti-Borrelia EUROLINE-WB免疫印迹、蜱PCR检测和八基因座多位点序列分型（multilocus sequence typing, MLST），系统比较了两种病原体在不同人群中的血清暴露、蜱感染率、检测方法一致性及菌株系统发育位置。结果显示，在I. persulcatus中B. burgdorferi s.l.感染率（45.3%）显著高于B. miyamotoi（10.9%），但人类血清学中B. miyamotoi累积血清反应性（2.6%）约为B. burgdorferi s.l.（0.4%）的六倍，呈现“蜱中相反”的格局。同时，单层LymeBest ELISA的阳性结果几乎全部未被蛋白阵列和免疫印迹确认，凸显了两步法在哈萨克斯坦实施的紧迫性。研究还报告了该国首例经分子和血清学证实的B. miyamotoi感染，具有重要意义。

研究人员采用的主要技术方法包括：对全部1300份血清样本进行多抗原蛋白阵列筛查，分别检测IgM和IgG并采用病原体特异性判读标准；对子集样本使用LymeBest ELISA（单层EIA）和Anti-Borrelia EUROLINE-WB免疫印迹进行平行比较和正交确认；对503只人源蜱进行形态学鉴定，以qPCR检测B. burgdorferi s.l.，以嵌套PCR检测B. miyamotoi的glpQ基因；对阳性样本进行八基因座MLST（clpA、clpX、nifS、pepX、pyrG、recG、rplB、uvrA）分型；统计采用EpiInfo 7，使用比值比（OR）、95%置信区间（CI）和Fisher精确检验。样本队列来自哈萨克斯坦南部和东南部四个地区的医院及社区，其中503名参与者提供了附着蜱。

结果部分如下：

3.1 蛋白阵列确定的B. burgdorferi s.l.和B. miyamotoi血清反应性
通过多抗原蛋白阵列筛查1300份血清，B. burgdorferi s.l.血清反应性仅4份（0.3%），全部来自Almaty地区；B. miyamotoi血清反应性31份（2.4%），集中于Almaty（2.8%）和Jetisu（0.6%），Zhambyl和Turkistan无阳性。未见同一病原体同时IgM/IgG阳性，亦无个体同时对两种病原体血清反应。蜱暴露组B. miyamotoi血清反应性（2.7%）高于其他组（1.4%），但无统计学差异。

3.2 血清反应性参与者的临床特征和随访
对11名非附着蜱组血清反应性参与者的随访显示三种抗体动态模式：一例反复发热并见红斑的患者出现B. miyamotoi IgM向IgG转换，多西环素治疗后症状缓解且IgG持续；另一例发热患者治疗后5个月内所有蛋白阵列标志转阴，符合已治疗急性感染的短暂反应；一例患者持续12个月孤立B. burgdorferi s.l. IgM阳性而无类别转换。另有一例B. burgdorferi s.l. IgG阳性伴进行性神经症状者，多西环素治疗后血清转阴并出现部分临床改善。

3.3 附着蜱参与者：蜱种、分子发现和随访
在503只蜱中，B. burgdorferi s.l. DNA检出37份（7.4%），其中I. persulcatus感染率45.3%，显著高于其他蜱种；B. miyamotoi DNA在64只I. persulcatus中检出7份（10.9%），两者共感染4份（5.8%）。对28名被Borrelia DNA阳性蜱叮咬者的随访中，4名（14.3%）出现延迟血清学证据，其中3名（10.7%）的血清转换可归因于所移除蜱。一名参与者在基线血中检出B. miyamotoi DNA，并于6个月后出现B. miyamotoi IgG血清转换，成为哈萨克斯坦首例分子证实的B. miyamotoi感染。MLST成功分型一株，属于ST633。

3.4 蛋白阵列、LymeBest ELISA和免疫印迹比较
在同时用三种方法检测的子集中，LymeBest ELISA的IgG阳性率（51.7%）和IgM阳性率（61.5%）远高于蛋白阵列和免疫印迹（分别为3.4%和0%）；27份基线LymeBest阳性样本均未被两种正交检测方法确认。4份蛋白阵列B. burgdorferi s.l.阳性样本中2份免疫印迹阳性。存档的47份晚期神经莱姆病血清经蛋白阵列复测全部阴性。

3.5 累积血清阳性率
结合基线血清反应性和随访血清转换，B. miyamotoi累积血清反应性为34/1300（2.6%），B. burgdorferi s.l.为5/1300（0.4%），所有阳性均来自Almaty和Jetisu，Zhambyl和Turkistan无阳性。

讨论部分总结指出，人类血清反应性中B. miyamotoi超过B. burgdorferi s.l.的模式与俄罗斯欧洲部分I. persulcatus分布区一致，而非西欧或北美的I. ricinus/I. scapularis模式。可能的原因包括B. miyamotoi经卵巢传播且可在蜱叮咬早期传播，其反复螺旋体血症和Vmp抗原变异使IgG应答更持久，以及该病原体未纳入常规诊断造成既往病例误分类。研究确认I. persulcatus是当地优势传播媒介，在人类叮咬蜱中的感染率高于先前报告。LymeBest ELISA与两种正交检测之间的显著不一致为两步法提供了实证支持，但LymeBest ELISA本身仍需独立验证。研究也指出，蛋白阵列无法将B. miyamotoi与其他回归热群疏螺旋体区分开，且MLST仅成功分型一株，属于ST633，与日本、蒙古和中国内蒙古报道的菌株一致，扩展了该基因型在中亚的记录。结论部分翻译如下：本研究首次在哈萨克斯坦提供了B. miyamotoi和B. burgdorferi s.l.人类暴露的综合血清学证据。在I. persulcatus流行的Almaty和Jetisu地区，未纳入当前国家诊断方案的B. miyamotoi在血清学上比B. burgdorferi s.l.更为普遍。这一取舍模式挑战了B. burgdorferi s.l.在Ixodes流行地区总是占主导地位的假设，并提示在缺乏特异性诊断的地区，回归热群血清反应性可能被大幅低估。LymeBest ELISA与蛋白阵列结果之间的差异进一步凸显了确认性检测的必要性。研究还记录了哈萨克斯坦首例经分子证实的B. miyamotoi感染，证据为基线血液中检测到B. miyamotoi DNA并随后发生血清转换。这些发现支持将B. miyamotoi特异性检测纳入国家诊断方案，对LymeBest ELISA进行独立验证，并在Talgar地区等高危疫源地开展针对性监测。